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ELISA试剂盒原理与步骤

发布时间:2020-08-28浏览次数:1043返回列表

ELISA试剂盒原理:


本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。用纯化的大鼠超敏C反应蛋白

(hs-CRP)捕获抗体包被微ELISA试剂盒孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入大鼠超敏C反应蛋白(hs-

CRP),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化ELISA试剂盒下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠超敏C反应

蛋白(hs-CRP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠

超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量。

ELISA试剂盒步骤

1、抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。


2、结合在固相载体表面的抗原ELISA试剂盒或抗体仍保持其免疫学活性。


3、酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。


4、受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。


5、此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。


6、加入酶反应的底物后,底物ELISA试剂盒化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。



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