大鼠Elisa试剂盒实验原理及请求
发布时间:2020-11-25浏览次数:1012返回列表
大鼠Elisa试剂盒试验原理:
大鼠Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA).已知Caspase-3浓度的标准品、未知浓度的样品参加微孔酶标板内进行检测。先将Caspase-3和生物素符号的抗体一起温育。洗刷后,参加亲和素符号过的HRP。再经过温育和洗刷,去除未结合的酶结合物,然后参加底物A、B,和酶结合物一起作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Caspase-3的浓度呈比例关系。
大鼠Elisa试剂盒样本处理及请求:
1. 血清:室温血液天然凝固10-20分钟,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保留过程中如呈现沉积,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的请求挑选EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保留过程中如有沉积构成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管搜集,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保留过程中如有沉积构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检查排泄性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清。检查细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml摆布。经过重复冻融,以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保留过程中如有沉积构成,应再次离心。
5. 安排标本:切开标本后,称取分量。参加必定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻保留备用。标本消融后依然坚持2-8℃的温度。参加必定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心搜集上清。分装后一份待检查,其他冷冻备用。
6. 标本收集后尽早进行获取,获取按有关文献进行, 大鼠Elisa试剂盒获取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验,可将标本放于-20℃保留,但应防止重复冻融。
大鼠Elisa试剂盒注意事项:
1. 大鼠Elisa试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。