Elisa试剂盒原理：

 1.双抗体(原)夹心法：检测抗原(体)的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原，不能测 小分子半抗原)。

 2.间接法：检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。

 3.竞争法：检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。

Elisa试剂盒操作注意：

 ① 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

 ② 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

 ③ 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

Elisa试剂盒测定步骤：

1.加样

 1. 除包被外都需45度加样

 2.加样体积要准确

 3.管底加样，不能加在管壁上

 4.加样时不能产生气泡

2.温浴  

 1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

 2.各ELISA板不应叠在一起。

 3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

 4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤  

 1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。

 2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板  

 1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。

 2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。