细胞培养方方法及预防污染的方法
发布时间：2024-03-18浏览次数：264返回列表
细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。
细胞培养是指从体内组织取出细胞膜，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的一种培养技术。目前细胞培养方式主要包括以下三种：
1、贴壁培养
贴壁培养主要适用于贴壁依赖性细胞。此类需要相互依赖，需贴附于不起化学作用的物质（玻璃或塑料等无活性物质）的表面生长、生存和维持，并终在附着面生长至单层，铺满平面时便会发生接触抑制。大多数动物细胞，包括非淋巴组织的细胞和许多异倍体体系的细胞属于这一类型，他们需要附着于适量正电荷的固体或半固体的表面胜仗。
2、悬浮培养
来源于血液、淋巴组织的细胞，及许多肿瘤细胞（包括杂交瘤细胞）和某些转化细胞等属于悬浮培养型细胞，细胞为非贴壁依赖性细胞，无需支撑面，细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖。悬浮培养是大规模细胞培养的理想方式，可采用类似于微生物的方法进行悬浮培养。
3、固定化培养
动物细胞较微生物脆弱，易受剪切力等的影响，而细胞固定化技术可较好的保护细胞免受机械力及环境变化的影响，提高细胞的耐受力，促使细胞高密度培养，提高目的产物的产率。在传统的固定化酶技术中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作为固定化细胞载体。但在动物细胞培养中，一般使用较温和的固定方法，如吸附、包埋、中空纤维或胶囊化等，具有剪切力低、传递和抗污染能力强、细胞生长密度高、产物易于收集和分离纯化等特点。
由于所培养的细胞的不同，固定化培养的方式也有不同，一般对于贴壁依赖性细胞通常采用胶原包埋，而对于非贴壁依赖性细胞则常用海藻酸钙包埋。常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化等。
防止细胞培养出现污染的方法如下：
1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。
3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。
4、使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。
5、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。
细胞培养是指从体内组织取出细胞膜，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的一种培养技术。目前细胞培养方式主要包括以下三种：
1、贴壁培养
贴壁培养主要适用于贴壁依赖性细胞。此类需要相互依赖，需贴附于不起化学作用的物质（玻璃或塑料等无活性物质）的表面生长、生存和维持，并终在附着面生长至单层，铺满平面时便会发生接触抑制。大多数动物细胞，包括非淋巴组织的细胞和许多异倍体体系的细胞属于这一类型，他们需要附着于适量正电荷的固体或半固体的表面胜仗。
2、悬浮培养
来源于血液、淋巴组织的细胞，及许多肿瘤细胞（包括杂交瘤细胞）和某些转化细胞等属于悬浮培养型细胞，细胞为非贴壁依赖性细胞，无需支撑面，细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖。悬浮培养是大规模细胞培养的理想方式，可采用类似于微生物的方法进行悬浮培养。
3、固定化培养
动物细胞较微生物脆弱，易受剪切力等的影响，而细胞固定化技术可较好的保护细胞免受机械力及环境变化的影响，提高细胞的耐受力，促使细胞高密度培养，提高目的产物的产率。在传统的固定化酶技术中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作为固定化细胞载体。但在动物细胞培养中，一般使用较温和的固定方法，如吸附、包埋、中空纤维或胶囊化等，具有剪切力低、传递和抗污染能力强、细胞生长密度高、产物易于收集和分离纯化等特点。
由于所培养的细胞的不同，固定化培养的方式也有不同，一般对于贴壁依赖性细胞通常采用胶原包埋，而对于非贴壁依赖性细胞则常用海藻酸钙包埋。常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化等。
防止细胞培养出现污染的方法如下：
1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。
3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。
4、使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。
5、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。
