大鼠促性腺激素释放激素受体,GnRHR,检测试剂盒
大鼠促性腺激素释放激素受体,GnRHR,检测试剂盒 说明书Elisa检测试剂盒专业售后服务提供代测:规格:96T/48T试剂盒说明书:...
大鼠促性腺激素释放激素受体,GnRHR,检测试剂盒
说明书Elisa检测试剂盒专业售后服务提供代测:
规格:96T/48T
试剂盒说明书:48孔配置一份/96孔配置一份
种属:人、大鼠、小鼠、兔、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等,多年专业酶免服务,质量保证,提供代测服务
大鼠促性腺激素释放激素受体,GnRHR,检测试剂盒 Elisa试剂盒操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
大鼠促性腺激素释放激素受体,GnRHR,检测试剂盒 包装规格:
48孔配置 | 96孔配置 | 保存 | |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃低温保存 |
标准品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃低温保存 |
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细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
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