BICR 6细胞，细胞株培养
发布时间：2016-05-04浏览次数：707返回列表
产品名称：BICR 6细胞，细胞株培养
中文名称：人胚肾细胞；表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞
规格：25T
形态特性：圆形
生长特性：悬浮生长
特征特性：该细胞稳定表达SV40大T抗原，并且促进适病毒产物的产生。
培养条件：DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS
传代方法：1：2传代
库存状态：素尔现货
上海素尔生物提供400多种类细胞株细胞系，质量稳定，价格优惠，传代次数少，细胞状态良好，饱满，有光泽，提供多项细胞复苏服务，原代细胞和耐药株的建立，细胞染色，STR分型鉴定。囊括归纳：1.细胞培养（代养细胞） 2.整体课题中细胞培养 3.MTT(1-48) 4.MTT(49-72) 5.MTT(73-96) 6.细胞凋亡检测(普通) 7.细胞凋亡检测(细胞有绿色荧光) 8.细胞周期检测 9.质粒转染 10.平板克隆形成 11.细胞划痕 12.transwell 13.transwell侵袭 14.ROS活性氧检测 15.线粒体膜电位检测。
BICR 6细胞，细胞株培养，如需要订购，请提供贵单位名称、发票抬头、收货地址、正确邮编号，联系方式： QQ： 张昕
具体操作
一. 实验前准备：
1.将水浴锅预热至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
二．取出冻存管：
1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
三．迅速解冻：
1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
四.平衡离心：用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min
五.制备细胞悬液：
1.吸弃上清液。
2.向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。
六.细胞计数：细胞浓度以5×105/ml为宜。
七.培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。
初学者易犯错误：
1水浴锅未预热或者未预热到37℃。
2.水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。
3.离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。
4.一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。
（另：冷冻细胞解冻程序）
2.1. 依据细胞株数据单之基础培养基种类、血清种类和其它之成份和比例， 制备培养基。大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类， 若因实验需要， 必须有所不同时， 务必以缓慢比例渐次改变培养基组成， 确定细胞适应后， 方进行所需之实验。
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异大，请务必依据细胞株资料单之血清种类培养之。
2.3. 将培养基置于 37 °C水槽中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭之， 移入无菌操作台内。取出冷冻管， 立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部， 移入无菌操作台内。
2.4. 依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。
2.5. 对大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。唯对少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后， 转移至培养瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。收到T25 flask 细胞时， 处理方式为︰
1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。请检查flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题， 不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。
2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至37 °C， 并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，依 一般培养方式再将细胞置入培养箱中或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。
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