细胞介绍

　　在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合，构建了人脐静脉细胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。 EA.hy926已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性如血管生成，体内平衡/血栓形成，血压及炎症反应。

　　细胞特性

　　1) 来源：静脉内皮细胞与A549细胞株融合

　　2) 形态：梭形，贴壁生长

　　3) 含量：>1x106 个/mL

　　4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5) 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

　　运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

　　细胞用途：仅供科研使用。

　　细胞培养步骤

　　一.培养基及培养冻存条件准备：

　　1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H，GIBCO，货号12800017，添加NaHCO31.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。(DMEM液体培养基：GIBCO，11995-065)。

　　2) 培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3) 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二. 细胞处理：

　　1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

　　2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

　　注意事项：

　　1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

　　EA.hy926细胞，人脐静脉融合细胞 来源：上海素尔生物科技有限公司