人肾癌Wilms细胞(G-401)

　　细胞介绍

　　G-401细胞来源于韦尔姆斯氏瘤，该细胞表达成肾细胞生长因子。

　　细胞特性

　　1) 来源：肾脏

　　2) 形态：上皮细胞样，贴壁生长

　　3) 含量：>1x106 个/mL

　　4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5) 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

　　运输和保存：使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后，请先在显微镜下检查细胞生长状态，并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后，再次检查细胞状态。若状态良好，可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物，请及时与我们取得联系。

　　细胞用途：仅供科研使用。

　　细胞培养步骤

　　一.培养基及培养冻存条件准备：

　　1) 准备McCOY's 培养基(McCOY's ，SIGMA,货号M4892，添加NaHCO32.2g/L)，90%;优质胎牛血清，10%。

　　2) 培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3) 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二.细胞处理：

　　1)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

　　2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

　　注意事项：

　　1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。