（GB 4789.3-2010）

6操作步骤

6.1  样品的稀释

6.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～l0000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1：10的样品匀液。

6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，混匀，制成1：10的样品匀液。

6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCI调节

6.1.4用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。

6.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。

8.2平板计数

8.2.1 选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。

8.2.2及时将15 mL --20 mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液混匀，待琼脂凝固后，再加3  mL --4  mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃土1 0C培养18 h～24 h。

8.3平板茵落数的选择

    选取菌落数在15 CFU～150 CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm或大。