成纤维细胞之人皮肤成纤维细胞操作程序

发布时间：2017-03-08浏览次数：3746返回列表

成纤维细胞外增殖能力作为衰老生物学标志，广泛用于衰老研究，成为衰老研究的重要工具。

人皮肤成纤维细胞操作程序：

1.将手术切取的皮肤(或小儿包皮)置玻璃培养皿内，用含较高浓度抗生素(常用200～300IU青霉素，200～300μg链霉素/ml)的Hank′s液清洗2次。用锋利的眼科剪，尽可能将皮肤上的脂肪与结缔组织去除干净;

2.转移上述皮肤至另一玻璃培养皿内，用Hank′s液清洗后，吸尽液体。用剪刀将皮肤剪成直径约1mm大小的组织块，再用Hank′s液清洗1次，吸干，滴1～2滴小牛血清;

3.将皮肤组织块接种至涂有鼠尾胶原的玻璃培养瓶(或塑料培养碟)内，每平方厘米面积可接种10～15块组织;

4.翻转培养瓶，使有组织块的一面处于上位，同时加入适量培养液(见材料与设备项)，25ml的培养瓶可加2～3ml，塞紧瓶塞(若CO2孵箱，用螺口培养瓶，此时螺帽不要旋得太紧，以便与外界气体交流)，置37℃温箱(或含5%CO2的孵箱);

5.2～4小时后，轻轻翻转培养瓶，使组织块浸没于培养液中;

6.一般不必每天观察，因为晃动后会影响组织块的贴瓶与生长。10天左右再观察，若有污染，弃之;若培养液变黄可换液;

7.通常组织块于1周左右长出细胞，当细胞长满瓶底面时可按第二节中描述的方式传代。

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