粘质沙雷伯氏菌使用说明：
    1、离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大， 死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
    2、复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
    3、加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响 细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是 10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
    4、复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
    5、粘质沙雷伯氏菌细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
    6、启开菌种前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开塑盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞，加入0.3mL左右的配套液体培养基，用无菌滴管反复吹吸，将冻干菌种溶解成为悬液，然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基，并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。
    7、冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。
    8、次日观察菌种的生长情况，如未生长，应继续培养24h，或吸取培养之后的西林瓶剩余菌悬液再次接种培养基，培养24h观察。
    9、复苏后的菌种在传1-2代后使用，建议菌种使用5代后弃用。
    10、粘质沙雷伯氏菌的使用中，取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。