MF2328 Stable化学感受态细胞

Stable化学感受态细胞（NEB克隆）：Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率的大肠杆菌菌株，特别适合分离含重复元件和不稳定插入序列的质粒克隆，也适合分离和扩繁逆转录病毒/慢病毒载体克隆。

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats 直接重复片段；Lentiviral expression vectors 慢病毒表达载体；Gibson Assembly 一步法克隆检测试剂盒；

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货号	产品名称	规格	价格（元）
MF2328-1000UL	Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞	10×100μl	280
MF2328-5000UL	Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞	50×100μl	1280

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产品组分：

组分编号	组分名称	货号（规格）
		MF2328-1000UL	MF2328-5000UL
MF2328-A	Stable Competent Cell	10×100μl	50×100μl
MF2328-B	Control Vector puC19, 10 pg/µl	10μl	10μl

菌株描述

Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率的大肠杆菌菌株，特别适合分离含重复元件和不稳定插入序列的质粒克隆，也适合分离和扩繁逆转录病毒/慢病毒载体克隆。与商业化的同源重组反应体系比如NEBuilder HiFi DNA Assembly，Gibson Assembly反应体系和酶切连接体系都兼容。Stable菌株基因型与Stbl2，Stbl3没有关联性，但具有更优异的性能（见图1）。基因组含有重组酶recA1 relA1突变，能有效抑制长末端重复序列的重组，降低了错误重组的频率。还含有核酸酶内切酶endA1突变，避免了质粒提取过程中核酸酶的污染，显著提高制备质粒的产量和质量。基因组含有lacZΔM15，适用于蓝白斑筛选。菌株本身含链霉素和四环素抗性，在成功转化后赋予其额外的筛选标志。

Stable菌株基因型：F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

菌株亮点

◇   Stable菌株具有很高的转化效率，经pUC19检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA；

◇   Stable菌株是基因克隆进入腺病毒/慢病毒载体的推荐宿主菌；

◇   Stable菌株是克隆正向重复序列和反向重复序列的推荐宿主菌；

◇   Stable菌株含recA1突变，能减少克隆DNA的重组发生，从而降低错误重组频率；

◇   Stable菌株含mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，能有效转化真核来源的甲基化DNA或PCR、cDNA和许多其他来源的非甲基化DNA;

◇   Stable菌株含endA1（非特异核酸内切酶I）突变，确保得到zui高质量和产量的质粒；

◇   Stable菌株含fhuA突变，具有对噬菌体T1的抗性；

◇   Stable菌株含lacZΔM15，适用于具α-互补载体的蓝白斑筛选；

产品描述

本品是Stable菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

Stable与Stbl3克隆性能（错误重组率）的比较

图1. Stable与Stbl3克隆不稳定DNA序列的性能比较。pUC-5xREP含5 x 32bp 重复序列，其在普通大肠杆菌中很不稳定。酶切后线性化的pUC19片段2.2ng+1ng 5xREP DNA段配制成重组反应体系，重组反应完成后分别转化Stable感受态细胞（A）或Stbl3感受态细胞（B），复苏60min，涂布在含50μg/ml羧苄青霉素的LB平板，30℃培养20h。之后做菌落PCR，检测5xREP DNA插入的稳定性（含有正确插入片段的克隆，菌落PCR片段为623bp）。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】【详见MKBIO内容】

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体SOC培养基配方

附录1. Stable感受态细胞常见问题【详见MKBio内容】

1.      Stable菌株的基因型和各基因赋予菌株的特征？

Stable基因型：F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

◇   蓝白斑筛选（Φ80 Δ(lacZ)M15）：使得β-gal omega段。lacX74去除染色体上的β-gal基因。pUC19和相似基因编码β-半乳糖苷酶（lacZ）的α肽。α肽与β-半乳糖苷酶的omega段（由F'携带，α-互补）结合。当β-半乳糖苷酶按照这种方式重新组合后能正常表达并切割X-gal生成蓝斑。当克隆DNA进入质粒破坏α肽基因，使得菌落为白斑。

◇   重组缺陷（recA1）：大肠杆菌（E. coli）本身具修复系统能重组同源序列。基因组克隆通常有复制区，recA介导的重新排列不确定，特别当同源序列长于50bp。recA功能缺失的菌株比recA+菌株通常更缓慢生长。

◇   内切酶I缺陷（endA1）：野生型大肠杆菌的周质空间含非特异性内切酶。从这些菌株中制备质粒特别要注意质粒被降解。endA突变去除这个基因，显著改善了质粒制备物的质粒。

◇   限制缺陷（Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)）：野生型大肠杆菌K12菌株含限制性内切酶，能切割含位点(AAC(N6)GTGC和GCAC(N6)GTT的DNA。虽然大肠杆菌DNA自身受保护，不被同源甲基转移酶所降解，但外源DNA会在这些位点被切割。限制缺陷删减了甲基转移酶和内切酶的基因。

◇   甲基限制缺陷（mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)）：大肠杆菌具有一套酶系统，mcrA，mcrB和mrr能够切割在高等真核生物和某些植物、细菌菌株发现的甲基化DNA。来自PCR扩增片段，cDNA或原先在大肠杆菌内扩繁的DNA不会被甲基化，也不会被切割。

◇   T1噬菌体抗性（fhuA）：T1，一种端烈性噬菌体需要大肠杆菌羟肟酸铁吸收受体用来感染。这个基因的删减赋予对这个噬菌体的抗性，且不会显著影响转化或细胞的生长特征。

2.      Stable感受态细胞能替换Stbl2或Stbl3吗?

答复：是的

3.      Stable感受态细胞适合大质粒转化？

答复：是的

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

Stable化学感受态细胞
Stable化学感受态细胞
Stable化学感受态细胞

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