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小鼠白细胞介素5(IL-5)ELISA试剂盒注意事项

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  • 更新日期:2017-07-24 15:54
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详细介绍
小鼠白细胞介素5(IL-5)ELISA试剂盒注意事项
1. 在使用前,一抗二抗均应测试其合适的稀释度。
2. 多聚甲醛的固定是不稳定的,标本经多聚甲醛固定后,应再用去污剂处理,如果标本在水溶液中浸泡的时间过长,则会使交联结构解体。因此,应避免固定后的标本在水溶液中浸泡的时间过长。
3. 信号微弱的解决方法:
① 提高一抗和二抗的浓度以增强敏感性 ,这必须测试各种浓度抗体的滴度;
② 延长一抗和二抗的孵育时间。由于细胞染色时抗原吸附在固相载体上,抗原抗体结合时间较在溶液中长。孵育时间可因实验设计作适当调整,但少于20min抗体和抗原几乎不能有效结合。在以上两点中,应摸索出一个条件以产生有效信号且保持良好的背景。这就需要反复试验,因为每组抗体和抗原的情况会有所不同;
③ 改变检测方法,用共聚焦显微镜观察,可提高敏感性。
检验方法
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
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