植物果胶果酯酶（PME）试剂盒（ELISA）使用方法

植物果胶果酯酶（PME）试剂盒（ELISA）使用说明书

l 本试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物果胶果酯

酶（PME）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物果胶果酯酶 （PME）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物果胶果酯酶（PME）呈正相关。用酶标仪在450nm 波 长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

植物果胶果酯酶（PME）试剂盒（ELISA）样本处理及要求

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000 ×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。 推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。Z后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟， 取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响Z后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精du加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

植物果胶果酯酶（PME）试剂盒（ELISA）剂盒组成

务必准备充足的标本备份。

2. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，wang站电子版说明书仅作参考。

3. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到zui佳的检测结果。

4. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

5. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA 实验结果偏差。

6. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

7. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。