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酒石酸酸性磷酸酶染液实验原理

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  • 更新日期:2020-12-07 11:16
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详细介绍
中文名称:酒石酸酸性磷酸酶染液

细胞和组织的酸性磷酸酶染色主要由萘酚、六氮化对品红、亚硝酸钠等组成,染色后酶活性部位呈红色。

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等。

【产品介绍】抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬细胞等部位的TRAP和存在于细胞白血病人脾脏TRAP均在细胞滤泡中,并不释放入血液,血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞。因而测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。

【染色原理】在碱性的缓冲液中,细胞内酸酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生成不溶性的偶氮染料沉淀,当底物中存在酒石酸时,该反应只出现在特异性细胞中。

【染色结果】阳性反应为鲜红色或深红色颗粒,定位胞浆。

【产品优点】

① 磷酸酶系列染色液为重氮偶联法,染色效-果好,磷酸酶的特异性反应沉着于胞浆当中,形成红色或红棕色的颗粒沉淀。再通过核染色液的复染色,对比度清晰、分明。

 ② 染色液无嗅、无味、无刺激、不脱色,不含有毒性的物质,对人体无伤害。 ③ 操作步骤简单,只需固定—底物液孵育—复染三步,省时、准确、操作简便。 ④ 染色建议使用水性介质-甘油明胶进行封片固定。⑤ 该磷酸酶系列染色液均使用进口原料,质量保证,价格低廉,特别是抗酒石酸酸性磷酸酶染液,为国内独-家生产,物美价廉。

【所需仪器】光学显微镜、玻片、染缸、滴管、秒表、记号笔等。

具体试剂配制及操作:

一、固定液:液体,40ml×1瓶

新鲜血涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片用固定液固定5~10min。石蜡包埋的切片经脱腊后不需要再固定。

二、底物反应液(一)、(二)、(三)、(四)的组成及配制:

●底物反应液(一)组成及配制

组成:(1)A粉×1支    (2)B液500ul×1支

(3)C粉×1支    (4)D液500ul×1支

配制:临用前将B液用移液器吸入A粉中充分溶解配成甲液,备用

再将D液移液器吸入C粉中充分溶解配成乙液,备用

zui后将甲液与乙液混合成底物反应(一),备用

●底物反应液(二)组成及配制:

组成:(1)E粉×1支    (2)F500ul×1支

配制:临用前将底物反应液二的F液移液器吸入E粉中充分溶解配成底物反应液(二),备用。

●底物反应液(三):G液1ml×1支,备用

●底物反应液(四)组成及配制:

组成:(1)H粉×1支    (2)I液500u l×1支

配制:临用前将I液移液器吸入H粉中充分溶解配成底物反应液四,备用

 
 
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