抗酒石酸酸性磷酸酶染色液简介说明

产品名称：抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
产品分类：酶类染色
规格：4×10ml/4×20ml
保存：-20℃避光，6个月
用途：细胞和组织的抗酒石酸酸性磷酸酶染色
注意事项：主要由萘酚、六氮化对品红、亚硝酸钠等组成,染色后酶活性部位呈红色。

简介：酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resis acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

自备材料：
1、蒸馏水、恒温箱
2、载玻片、推玻片
3、光学显微镜

操作步骤(仅供参考)：
(一)血液、细胞涂片：
1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、复染：苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、水洗、晾干、镜检。

(二)冰冻切片：
1、冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定1～3min。
3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、水洗、晾干、镜检。
(三)石蜡切片：
1、石蜡切片脱蜡5～10min，重复一次。
2、无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、水洗2min。
4、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
5、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
6、切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，浸染45～60min，水洗。
7、复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
8、水洗、晾干、镜检。

染色结果：
阳性颗粒  紫红色
细胞核   蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

临床意义：
1、毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制，其他细胞均呈阴性或极弱阳性。
2、急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一。
3、T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。