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丁基-琼脂糖凝胶 H.P.简介说明

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  • 更新日期:2022-01-20 16:22
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详细介绍
产品名称:丁基-琼脂糖凝胶 H.P.
性状:白色微球,凝胶状,保存在20%酒精溶液中
凝胶类型:疏水层析填料
结构成分:6%交联琼脂糖
粒径:24-44μm
工作PH值:2-14(短时间);3-12(长时间)
操作温度:4-40℃
配基密度:40μmol/mL
保存条件:4~25℃密闭保存
应用:疏水层析介质,高分辨率,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。

操作步骤
1 装柱
(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2 平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3 上样
(1)样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。
(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢。

4 洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如0.02~0.05mol/L的PBS。

5 再生
一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6 在位清洗
(1)对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
(2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH 去除。
(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。

8 去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:
(1)2倍柱体积的70%乙醇;
(2)2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH5;
(3)1倍柱体积4M尿素;
(4)3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl;
上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9 消毒 用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
 
 
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