小鼠雌二醇E2 ELISA试剂盒说明书

小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒产品介绍：

应用：定量检测小鼠血清、血浆、细胞液、体液以及组织匀浆中 E2 的含量
（详细说明书以英文为准）
产品编号：E03E0023

本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一．小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒 试剂盒组成
名称 规格 数量 保存
1 预包被平底微孔板 96 孔 1 可拆卸板 2-8℃密封冷藏
2 酶结合物(HRP) 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
3 标准品 1 毫升 6 瓶 2-8℃冷藏
4 显色剂A 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
5 显色剂B 6 毫升 1 瓶 2-8℃避光冷藏
6 终止液 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
7 浓缩洗涤液 (100 倍浓缩) 10 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
8 平衡液 3 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
9 使用说明书 1 份
注意：平衡液仅仅适用于标本是细胞液、体液以及组织匀浆样品的检测时所使用

二．小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒样本处理及保存：
1. 血清
采集血清时不加抗凝剂，采集后室温静置 1-2 小时，1000 × g (或 3000 rpm)离心 15 分钟，
取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。
2. 血浆
采集血浆，要加入总体积 1%的抗凝剂 (EDTA，肝素等)，采集后先室温或 4℃静置半
小时后，1000 × g (或 3000 rpm)离心 15 分钟，取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。
3. 组织裂解液
组织裂解的方式取决于组织的类型，一般来讲，先用预冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗组织后称重。一般 0.5g 组织加入 1-5ml 预冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰
上的玻璃容器内研碎。用超声或者反复冻融的方法裂解细胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 离
心 15 分钟后取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。
4. 细胞裂解液
1) 悬浮细胞直接离心取细胞沉淀。贴壁细胞需用胰酶消化后离心取细胞沉淀。检测某些指
标时不能用胰酶消化。
2) 用 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗 3 遍。
3) 用少量 PBS 重悬细胞，超声或者反复冻融的方法裂解细胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 离
心 15 分钟后取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。
5. 细胞上清及体液
1000 × g (或 3000 rpm)离心 15 分钟，取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。
注意事项：
1. 样本收集完毕后，要分装保存在-20°C (少于 3 个月) 或-80°C (少于 6 个月)以保持蛋白活
性和避免污染。避免反复冻融 如果要在 24 小时内分析样本，可以保存在 2- 8°C。
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2. 冻存的样本应该缓慢的恢复到室温，然后慢慢地混匀，不能加热来融化样本。
3. 某些化学裂解液会对某些指标的检测会有干扰，比如 SDS，Triton。谨慎使用。
4. 样本液中含有沉淀物会对 ELISA 有干扰，务必离心去除。
5. 不要使用高脂血或溶血的样本，对 ELISA 有干扰，导致检测结果不准确。
6. 其他样本的准备方法，请联系蓝基技术部售后服务人员。

三．小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒试剂准备
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。
2. 加 10 L 的平衡液于 100 L 的样品中，比例不要小于 1:10，混匀。如果标本是血清或
者血浆，此步骤忽略。
3. 洗液的配制：按 1:100 的比例配制洗液备用。

四．小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒操作步骤（实验前必须仔细看实验准备）
1. 取出试剂盒，于室温（20-25℃）放置 30 分钟。
2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入 100 L 的标准品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入 100 L 的样品，空白对照加入 100 L 的蒸馏水。
4. 在各孔中加入 50 L 的酶标记溶液（不含空白对照孔）。
5. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1 小时（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度）。
6. 充分清洗酶标板 5 次，保持各孔有充足的水压（浓缩洗涤液以 1：100 的比例与蒸馏水
稀释）。
7. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干。
8. 各孔加入显色剂 A 50 L。
9. 各孔加入显色剂 B 50 L。
10. 20-25℃下避光反应 10 分钟。
11. 各孔加入 50 L 终止液，终止反应。

五．小鼠雌二醇 ELISA 试剂盒实验注意事项
1. 实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2. 加样：加样时，要控制加样速度，避免一孔与后一孔之间的时间间隔过大，否则将
会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在
10 分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器。
3. 孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，同时要消除板底残留
的液体和手指痕迹，避免影响后的酶标仪读数。
5. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，10 分钟左右），如
果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
6. 建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应
的稀释倍数。
7. 建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒
有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但
概不承担产品本身以外的任何损失。