R6202 花生过敏原检测试剂盒

德国拜发公司 华南地区总代理 广州测迪生物科技有限公司技术咨询，产品购买 杨经理RIDASCREENFAST Peanut酶联免疫法定量检测花生

 广州测迪生物科技有限公司是一家集研究、开 发、生产及销售于一体的企业。我公司主要致力于食品安全快速检测技术方面的研究和开发，同时代理多种进口及国内食品安全、动物诊断检测方面的试剂盒、金标卡、生化试剂及实验室仪器和相关耗材。此外，我公司与国内有知名品牌的实验室家具商合作，承接HACCP实验室设计及家具配套服务。科技是发展的源动力，我公司与华中农业大学、中国农业大学等科研机构合作，不断研发一系列产品应用于食品企业、农产品检测中心、检验检疫局、动物疫病检测中心、兽防疫检疫站、及高等院校生物学院等各类专业实验室。业务是发展的支柱，我们拥有多年销售经验的业务人员，凭着他们丰富的专业技术知识为客户提供完善的技术服务。同时，我们不定期开展技术产品推广应用会议，传递领先的生物技术资信，同客记保持紧密的互动关系。公司自经营以来，我们一直秉诚“诚信至上，优质服务”的经营宗旨，在探索中前进，在知识与技术中谋发展。 本公司代理的产品有：德国米尼图人工授精设备精液稀释粉，荷兰赛迪cedi-diagnostics公司瑞士Prionics公司动物疾病诊断试剂盒华南区独家代理，比利时CER药物残留检测试剂盒华南区独家代理，比利时BIO-X药物残留检测试剂盒华南区独家代理，abraxiskits公司三聚氰胺/孔雀石绿检测试剂盒华南区独家代理，美国SAS公司微生物快速检测卡华南区独家代理，美国J.Tbaker公司固相萃取装置和固相萃取小柱及色谱试剂的一级代理，荷兰Creacon PCR仪一级代理，上海CLINX微生物显微成像系统一级代理，以色列Prospec公司生化试剂一级代理,biofutureDNA提取试剂一级代理，北京陆桥微生物培养基产品特约经销商等。 同时本公司还经销德国拜发R-Biopharm，英国RANDOX，荷兰ED等药物残留检测试剂盒。

酶联免疫法定量检测花生或花生碎粒

订货号：R6202

体外检测试剂 储存温度 2 - 8 °C

RIDA® 和 RIDASCREEN® 均为R-Biopharm 德国拜发公司的注册品牌标志制造商：R-Biopharm AG, Darmstadt, 德国R-Biopharm AG 拥有 ISO 9001 认证。

 

产品简介

RIDASCREEN®FAST Peanut（订货号：R6202）快速花生检测试剂盒，采用夹心酶联免疫法，用于定量检测食品中的花生或花生碎粒。

本品对早餐谷物、饼干、冰淇淋和牛奶巧克力的检测已经AOAC认证，认证号为030404。

试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。

试剂盒足够进行48次检测（包括标准测定）。

定量分析需要使用微孔板酶标仪。

 

样品处理： 均质、提取和离心

检测时间： 样品制备（以10个样品为例）.................约20分钟检测过程

（孵育时间）...................................30分钟

检测限： 1.5 ppm花生，相当于样品中0.00015 %的花生含量

定量限： 2.5 ppm 花生，相当于样品中0.00025 % 花生含量

 

特异性： 多克隆抗体可特异性检测花生蛋白以及所有花生过敏原Ara h1和 Ara h2。

燕麦、小麦、大麦、芝麻或大豆提取物不会干扰该检测。

与各豆类，如榛果仁、杏仁、核桃、腰果、开心果及山核桃等没有任何交叉反应。

与鹰嘴豆会产生0.001 %的轻微交叉反应，与青碗豆则会产生0.2 %的交叉反应。

 

1. 用途

RIDASCREEN®FAST Peanut快速花生检测试剂盒，采用夹心酶联免疫法，用于定量检测食品中的花生或花生碎粒。花生可以作为成份之一或外部污染物而存在和出现于未经加工的及经加热处理的食品中。

 

2. 概要

花生营养丰富，常被用作食品或饲料的原料。然而，花生却是强过敏性物质。其果粒中高达约25 %的蛋白质成分在具营养价值的同时也具有过敏性。其总蛋白含量7 - 10 %由过敏性蛋白（如花生球蛋白、伴花生球蛋白）组成。强过敏性人员仅摄入毫克级别的花生便可引致过敏反应，症状轻则仅为过敏性皮炎，重则因过敏性休克导致死亡。因为花生过敏是终身性存在的且无法根治，所以对此类过敏人员而言，重要的便是避免摄入花生。然而食品、化妆品或饮料中的花生成分或污染往往很难被检测出来。

 

为保护消费者免受花生过敏影响，人们建立了诸如火箭免疫电泳法、快速蛋白液相色谱法及酶联免疫吸附法等检测方法和体系，来检测样品中花生的存在及含量，从而增强产品对花生过敏者的安全性。

 

3. 检测原理

检测的基础是抗原抗体反应。微孔板中包被有针对花生蛋白的特殊抗体。加入标准品或样品，其中含有的花生蛋白和特殊的抗体结合形成抗体抗原复合物。没有结合的部分在洗涤步骤中被除去。随后加入过氧化物酶标记的抗体（酶连接物）。抗体酶连接物和抗体抗原复合物结合，形成抗体-抗原-抗体复合物（“三明治”夹心法）。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入孔中。和抗体结合的酶将发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm 处测量。吸光度值与样品中的花生浓度成正比。

 

4. 试剂盒组份

每一个盒中的试剂足够进行48个试验（包括标准测定），盒中的组份如下：

1 x 48孔微孔板（6条每条8孔） 包被有花生抗体

5 x 标准品*），每瓶1.3 ml 0 ppm（零标准品），2.5 ppm，5 ppm，10 ppm，20 ppm花生提取物水溶液，即用型

1 x 酶连接物（6 ml）.............................................................................红色瓶盖

过氧化物酶标记的抗体，即用型

1 x 底物/发色剂（10 ml）.......................................................................棕色瓶盖红色

1 x 反应终止液（14 ml）........................................................................黄色瓶盖含1 N的硫酸

1 x 提取缓冲液（125 ml）......................................................................白色瓶盖 20倍浓缩液

1 x 洗涤缓冲液（100 ml）......................................................................棕色瓶盖 10倍缓冲液

*） 已考虑了在样品处理的过程中产生的稀释倍数20。所以样品中花生浓度可直接从标准曲线中读出。

 

5. 另需的试剂和设备

 

5.1. 设备：

−微孔板酶标仪（450 nm）

−离心机 + 离心管

−振荡器

−水浴锅

−粉碎机，研钵，Ultra-Turrax匀浆机或者均质器

−刻度移液管

−可调式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器

 

5.2. 试剂：

−蒸馏水或去离子水

−脱脂奶粉（食品级）

 

6. 操作者应该注意之事项

反应终止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。

 

7. 储存条件

保存试剂盒于 2 - 8 °C，不要冷冻。

酶连接物不要冷冻，否则会导致错误的检测结果。一直保持储存温度2 - 8 °C，如果观察到沉淀告知制造商。

将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8°C条件下。

底物/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

对过了有效期（见试剂盒外标签有效期）的试剂盒不再提供任何质量保证。

不能交叉使用不同批号的盒中试剂。

 

8. 试剂变质的迹象

−红色底物/发色剂在使用前颜色变蓝

−标准品5的吸光度值小于0.8（A450 nm < 0.8）

 

9. 样品处理

以往分析的花生残留必须去除！样品处理应该在充分清洁或新的玻璃器皿中进行。

同样，粉碎机等设备必须在每次样品处理后进行清洁，去除花生残留。

提取缓冲液为20倍浓缩液。在稀释前在水浴锅中37 °C条件下充分溶解可能出现的结晶并混合。然后对加热后的浓缩液按比例1:20（1+19）用蒸馏水稀释（例如：100 ml缓冲液浓缩液 + 1900 ml蒸馏水，或者直接加入蒸馏水至2500 ml）。稀释后的提取缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约12周。

− 5 g样品小心粉碎，研磨并充分混合

−取其1 g样品，加入20 ml提取缓冲液（参见10.1.，即用型提取缓冲液的温度应为约60 °C）

−充分混合，在60 °C条件下提取10分钟，偶尔振荡。

−离心：10 min / 2500 g / 尽量保持4 °C或过滤提取液（或将2 ml提取液收集于一反应容器中，在微量离心机中高速离心10分钟）

−取100 μl上清液或滤液每孔进行检测

 

备注：

一般来说，巧克力中花生是可以检出的，但是在多数情况下非常困难（由于花生抗原被遮盖导致回收率下降到40 - 60 %）。为避免抗原被遮盖，建议在提取过程中加入1 g脱脂奶粉（食品级）。此方法同样适用于冰激凌。

样品提取物在2 - 8 °C条件下可保存5天。不用的提取物在 - 20 °C条件下可保存数月。

 

10. 检测步骤

10.1. 检测前的准备

6 RIDASCREEN®FAST Peanut 10-07-27

使用之前将所有试剂回温至室温（20 - 25 °C）。

洗涤缓冲液为10倍浓缩液，在稀释前如果存在结晶，应在37 °C水浴锅中加热完全溶解并混合。然后对加热后的浓缩液按比例1:10（1+9）用蒸馏水稀释（例如：100 ml缓冲液浓缩液 + 900 ml蒸馏水）。稀释后的缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约4周。

 

10.2. 检测操作

仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。

每次检测不应使用多于3条微孔板条（24孔）

1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架，记录下标准品和样品的位置。

2. 将100 μl标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中，在室温条件下（20 - 25 °C）孵育10分钟。

3. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。

4. 向每一个微孔中加入100 μl酶连接物溶液，在室温条件下（20 - 25 °C）继续孵育10分钟。

5. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。

6. 向每一个微孔中加入100 μl红色底物/发色剂，充分混合后在室温（20 - 25 °C）条件下暗处孵育10 分钟。

7. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液，充分混合。在加入反应终止液后30 分钟内于450 nm 处测量吸光度值。

 

11. 结果评估

请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件RIDA® SOFT Win（订货号：Z9999）来进行结果分析。

使用Cubic spline功能进行结果评估。

关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。

以下是没有使用软件的计算方法：

标准品的吸光度值和花生浓度mg/kg（ppm）的相互关系体现在半对数坐标系统曲线图中。每个样品中的花生浓度mg/kg（ppm）可以通过校正曲线上的吸光度值直接读出。

和标准曲线比较，如果A450 nm值较高，特别是零标准品，那么可能洗涤不够充分

如果吸光度值（A450 nm）大于标准品5，需继续稀释并重新检测，使检测值位于曲线中线性区域之内。

按照说明书进行操作，稀释倍数为20。花生浓度可以直接从标准曲线中读出（参见4. *）- 稀释倍数已经在标准品浓度值中被考虑。如果采用大于1:20的稀释倍数，在计算花生浓度时应考虑实际的稀释倍数。

 

请注意：

此检测中使用的花生提取物中含有约10 %的蛋白质成分。

必要是可按此比例对花生和花生蛋白含量进行换算。

 

以上信息是基于我们现有知识的基础上对我们的产品及其相关应用的说明。而并非对产品的任何特定性能或特定使用目的进行担保。R-Biopharm德国拜发公司不承担除试剂基本品质之外的任何责任。除因产品使用而造成的直接或间接损坏及损失外，其它有缺陷的试剂盒可退换。

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