蛋白表达与纯化技术服务

从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们提供给客户。

上海闪晶分子生物科技有限公司简介 上海闪晶分子生物科技有限公司，座落在漕河径开发区(原址：上海生物工程研究院），是专业从事生物技术服务的公司；公司拥有一批知名度较高的学科带头人和一支训练有素、多学科配合、以中青年科技人员为主的研究队伍。公司自研究所改制以来在分子生物学试剂盒、荧光定量PCR、siRNA载体构建、全基因合成拼接、荧光探针修饰、多肽合成、dNTP、Pfu酶、热启动Taq酶、DNA marker、基因工程、原生质体的培养、细胞融合、单克隆抗体诊断试剂等研究方向作了深入的研究； 闪晶生物地理位置图,点击放大！ 闪晶生物地理位置图,点击放大! 公司拥有从事基因工程、细胞工程、单克隆抗体研究的现代化实验室和先进的精密设备，如：实时PCR 扩增仪、多肽合成仪、 DNA 合成仪、 DNA 序列分析仪、 FPLC 、高压液相色谱仪、冻干机、 CO2 培养箱、大型摇床等。 上海闪晶生物自2004年成立以来，一直致力于“如何将科研技术转化成生产力”的工作，可喜的是闪晶公司在短短的几年内已经成功地完善了一系列的服务项目和试剂盒；公司始终坚持自己的理念：“专业公司，打造专业服务”。如果你有新的技术、新的项目或产品，需要合作转化，请与我们联系。 上海闪晶分子生物科技有限公司 地址:上海市闵行区北桥镇吴河路328号A栋2楼 邮编:201109 电话：021-54460831、54460832 免费电话：8009881995 E-mail: master@shinegene.org.cn or shinegene@vip.163.com 微信公众号:分子生物,仅提供技术资料和资讯.

蛋白表达与纯化技术服务 --zui低3000.00/蛋白，无风险！

步骤1. 目标基因全基因合成：

1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们提供给客户。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。 
价格：3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用． 
时间：2~3周，根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆：

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 闪晶生物提供如下表达载体：

expression Vector	Promoter	Tag
pET3a, pET11a, pET24a	T7/ac	None or T7 Tag
pET32a	T7/ac	TRX & HIS
pET41a	T7/ac	GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b	T7/ac	Secret
pET28a, pET15b, pRSETb	T7/ac	HIS
pET50b, pET43a	T7/ac	Nus, HIS
pPEPTIDE	T7/ac	HIS
pMAL-c2x	T7/ac	MBP
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P	T7/ac	GST
pQE30	T5	HIS
pTrcHisB	Trc	T7, HIS
pTWIN	T7/ac	Intein, CBD
pBV220	PRPL	None

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 
价格：  
时间：1-2周 
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, 0, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。 
价格： 
时间：1周 
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。 
价格：
1. 如果目标蛋白含有亲和标签（His-tag or GST-tag） 
5,000元（目标蛋白纯度>80%，不切除标签） 
5,500元（目标蛋白纯度>90%，不切除标签） 
6,000元（目标蛋白纯度>80%，切除标签） 
6,500元（目标蛋白纯度>90%，切除标签） 
2. 如果目标蛋白不含有亲和标签 
8,000元（目标蛋白纯度>80%） 
9,000元（目标蛋白纯度>90%） 
3. 如果没有获得目标蛋白，则不收取任何费用(仅限客户直接提供构建好的质粒时)。 
时间：2~3周, 蛋白表达订单下载 
备注：
1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们终根据实际情况将给客户提供少1mg，多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。 
2. 我们提供的终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。 
3. 每次Western blot检测多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务.

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