特别提示:包括5×非还原蛋白上样缓冲液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:5×非还原蛋白上样缓冲液
英文名称:5×Protein Loading Buffer (No Reducing Buffer)
产品货号:SY0358
产品规格:2ml
5×非还原蛋白上样缓冲液,是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液,可用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。本品不含还原剂。
本品含有SDS,SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS还可以断开分子内和分子间的氢键
,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)5×非还原蛋白上样缓冲液必须完全溶解后再使用。
操作方法
1)在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×非还原蛋白上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
2)按照每4 μl蛋白样品加入1 μl 5×非还原蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和5×非还原蛋白上样缓冲液。
3)100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
4)冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5)通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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名称:中等RIPA裂解液
货号:BTN131007
规格:250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强,对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果,本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表:
产品名称
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RIPA裂解液(强)
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RIPA裂解液(中)
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RIPA裂解液(弱)
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有效裂解成分
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1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS
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1% NP-40,0.5% deoxycholate,0.1% SDS
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1% NP-40,0.25% deoxycholate
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裂解强度
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强
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中
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温和
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对膜蛋白的提取
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很好
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较好
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一般
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对胞浆蛋白的提取
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很好
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很好
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很好
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对核蛋白的提取
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很好
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较好
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较好
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胞浆磷酸化蛋白提取
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很好
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很好
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很好
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细胞核转录因子提取
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很好
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很好
|
很好
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含蛋白酶抑制剂
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是
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是
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是
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含磷酸酯酶抑制剂
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是
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是
|
是
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主要用途
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WB,IP
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WB,IP
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WB,IP,co-IP
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储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zuì终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zuì终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
备注:
1.为取得zuì佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒,不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
关注
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货号
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名称
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规格
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BTN131118
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乙烯乙二醇
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200mL
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RFT193
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即用型PMSF溶液(100mM)
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10ml
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SY0319
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免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)
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100ml
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SY0412
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27mm透析袋(透析分子量7kDa)
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1卷(5米)
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SY0418
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DEAE弱阴离子高速交换树脂
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25ml|100ml|300ml
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SY0439
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人源氧化低密度脂蛋白
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2mg|2mg×5
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QN1088
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10×电泳转移缓冲液(转膜液)
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500ml
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本页产品地址:http://www.yi7.com/sell/show-8568249.html