WE0323 DAB显色试剂盒(WB IHC)

DAB显色试剂盒(WB IHC)的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品用于科研目的，我公司的DAB显色试剂盒(WB IHC)品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂

特别提示：包括DAB显色试剂盒(WB IHC)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DAB显色试剂盒(WB IHC)
英文名称：DAB Kit(20×)
产品货号：WE0323
产品规格：20ml|100ml

  DAB是HRP的常用底物，在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生不溶于水和乙醇的棕色沉淀。该试剂盒适用于HRP系统的的免疫组化中的组织切片、细胞爬片以及Western Blot中PVDF膜、NC膜等的染色。辣根过氧化物酶可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为褐色的化合物，可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。

试剂盒组成：

组份	20ml	100ml
20×DAB-A	1ml	5ml
1×DAB-B	20ml	100ml

注意事项：
1、工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
2、工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织片或印迹膜。
3、显色后的组织切片或细胞爬片可用苏木精或甲基绿复染。
4、对于组织切片，以每张切片用50μl显色工作液计算，1ml 20×DAB为400张切片的用量，3ml为1200张切片的用量。
5、为获得zuì佳实验结果，请务必优化实验条件。
6、显色后若背景太深，可以考虑延长封闭时间，避免非特异性染色，或者缩短DAB的显色时间；显色后若显色太弱或没有显色，可以考虑增加一抗或二抗的浓度，或者适当延长显色时间。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。

操作步骤：
1、DAB显色工作液配制：根据需要量，将20×DAB-A和1×DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升DAB-B中滴加1滴(约50μl)DAB-A，混匀即可。
2、显色：
1)印迹膜显色：将配制好的工作液滴加在印迹膜上(或将印迹膜倾入到DAB工作液中)即可显色。显色时间一般为1-5分钟。显色完毕后，将膜浸入水中，终止反应。
2)组织切片或细胞爬片显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到zuì佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃

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名称：核酸清除剂
货号：BTN81216
规格：1.5mL
本产品用于去除蛋白样品中的核酸污染。蛋白双向电泳的关键是制备好的样品，其中包括核酸的清除，因为核酸能与蛋白质结合，影响聚焦。同时，核酸的分子量大，容易堵塞凝胶，造成条带拖尾。此外，如果使用银染的方法检测蛋白质，污染的核酸也会被染色，为此我司开发了本产品。

产品特点：
1. 使用简单，加入样品中简单保温即可。
2. 效率高，10分钟内可以清除核酸(DNA和RNA)对蛋白质电泳的干扰。
3.基于酶学消化，所以会引入DNase和RNase。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在样品中加入0.1倍体积的本产品，轻柔混匀。
2.在冰上保温10-30分钟，使核酸降解成单核苷酸或寡核苷酸。

注意事项：
这两种酶也有可能在双向电泳图谱呈现蛋白斑点。用超离心方法也能除去核酸，但也可能除去大片分子质量的蛋白质，在低离子强度时，带负电的核酸和带正电的蛋白质会形成复合物，所以用高pH和高离子强度的溶液能减少这种反应，单zuì后还必需去盐。

名称：Protein G琼脂糖凝胶
货号：WE0270
规格：5ml
  本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似，通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点，可重复多次使用。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸钠缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：20 mM PBS，150 mM NaCl，pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液：0.1 M Glycine，pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：操作中如果没有实时的蛋白监测系统，收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，zuì后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

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