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HQF14 土壤免抽提直接PCR试剂盒

北京百奥莱博科技有限公司
会员指数: 企业认证:

价格:电议

所在地:北京

型号:HQF14

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更新时间:2023-04-19

浏览次数:752

公司地址:北京市海淀区紫雀路33号院3号楼

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产品简介

土壤免抽提直接PCR试剂盒是高品质的核酸扩增(PCR)产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于科学研究,本产品质量好,且具价格,深为用户称道,了解更多土壤免抽提直接PCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

公司简介

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品,可以为您提供专业的技术服务,以优良的价格、优质的服务、优先的理念,满足客户的各方面的需求,与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系,拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂
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产品说明

特别提示:包括土壤免抽提直接PCR试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


产品名称:土壤免抽提直接PCR试剂盒
产品货号:HQF14
产品规格:100次/500次/1000次

土壤直接PCR试剂盒(Soil Direct PCR kit)是在新一代DNA聚合酶基础上,专门为土壤DNA直接扩增设计的试剂盒。土壤直接PCR试剂盒采用特别设计的溶液系统可以快速从土壤样品中提取微量基因组DNA(5-20分钟内完成基因组DNA提取),提取的 DNA可以马上用于PCR反应,满足快速检测的需要,特别适合大规模基因检测。
PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析,进行下游的常规操作,例如限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析等。
产品:
(1)无需DNA抽提,样品处理快捷,可在5-20min内完成模板制备;
(2)PCR系统保证结果的稳定性和重复性;
(3)与现有的操作流程、实验步骤、常规检测手段兼容。
贮藏条件:
Direct PCR kits 可在-20℃下保存,有效期1年以上。

根据您的关注的土壤免抽提直接PCR试剂盒,您可能还对以下产品有需求:



名称:PCR级海藻糖溶液
货号:BTN130506
规格:1.5mL
本产品为浓度为5M的海藻糖的水溶液,可以直接添加到PCR反应体系或逆转录反应中提高酶的热稳定性和活性。

产品特点:
1.在反应体系中加入海藻糖,可以增加热敏感的酶在高温下的稳定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆转录酶(Reverse Transcripatase)的热稳定和热激活特性,使其在60℃仍具有全部活性,足以在mRNA二级结构诱导终止反应之前合成全长的cDNA,反应效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

储存条件:低温运输,4℃保存,保存期一年

使用方法:按照1/3体积,将本产品加入到PCR体系中即可。

名称:即用型PCR试剂盒(含染料)
货号:BTN90805
规格:1ml×10|5mL×20
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应,具有广泛的用途。

产品特点:
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷,操作步骤已经zuì大限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆,不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供,方便客户组合。

储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中,加入下列成分:
试剂 加入量
PCR MagicMix 15μl
DNA模板(自备) 哺乳动物基因组DNA 0.5-1μg
酵母基因组DNA 5-500ng
细菌基因组DNA 0.5-50ng
质粒DNA 5-500pg
PCR回收片段 1-100pg
PCR引物(自备) 10pmol each
补水到 30μL

放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳,按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意:
1.如果反应体系不是30μL,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804,30μL体系中加3uL),可能会对PCR有帮助。

PCR反应的影响因素
变性温度与时间:模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链DNA模板,PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全,DNA双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热DNA聚合酶的活力,zuì高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间:退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,DNA扩增效率下降;温度低产量高,但过低可造成引物与模板错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的zuì适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,退火时间一般为30~60秒,足以使引物与模板之间完全结合,长时间退火没有必要。
延伸温度与时间:PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定,如同样扩增2 Kb片段,若使用Taq酶只需1分钟,使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现,时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数:可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素,设定20-40个循环。循环次数太少,扩增量不足,如果循环次数太多,错配几率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
酶量:50μl反应体系可用0.5-5 U酶,酶量的选择与模板DNA的量,扩增片段大小等有关,酶量过多易发生非特异性反应,而且可能增加突变的机率,尤其在进行高保真扩增时,应尽量减少酶量,但酶量过少时反应性能下降。
模板:模板可以是单链DNA,也可以是双链DNA,质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多,不超过1μg为宜,因为加量过多可能导致非特异性扩增增加,但是要考虑模板中靶序列的含量。例如,使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列,就需要适当加大模板用量。
引物:引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸,zuì高不宜超过30个核苷酸,zuì佳长度为20~24个核苷酸,如需插入酶切位点,应在酶切位点5′端多加几个碱基,有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构,如发夹结构。两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3′端。如果可能,引物3′端zuì好富有GC,这样退火后有利于引物3′端的延伸。人工合成的引物zuì好经过色谱层析纯化或PAGE纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右,浓度太高会导致非特异性扩增,太低则扩增产物太少。

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