特别提示:包括通用反转录试剂盒(不含Taq酶)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:通用反转录试剂盒(不含Taq酶)
英文名称:Universal RT-PCR Kit(M-MLV, free Taq polymerase)
产品货号:QN0943
产品规格:50T|100T
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应。它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物用于后续的PCR扩增和分子克隆实验。
本试剂盒中配置的酶为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意事项:用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤除菌处理。
储存条件:-20℃保存,避免反复冻融,有效期12个月。
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货号
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名称
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规格
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YT383
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PCR Master Mix (含绿色电泳染料)
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400次|2000次10000次
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WE0105
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BAmp DNA Polymerase
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500U
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WE0117
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BalbMulti多重PCR Mix
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1ml|5ml
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WE0118
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结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
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50次
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WE0153
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快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料)
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5ml
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WE0156
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BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(高含量ROX校正染料)
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5ml
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关注
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货号:BTN100839
规格:250mg
本产品为PCR级的甲酰胺,其可以促进某些引物、模板退火,降低带有二级结构的DNA的变性温度,是一种常用的PCR增强剂。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
名称:DNA Shuffling试剂盒
货号:BTN131178
规格:10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组,它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术,它以一个或多个基因为起始材料,通过先随机断裂成小片段,再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物),zuì后再进行常规PCR(外加引物)等处理,zuì后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化,1-2天即可完成,节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
试剂盒组成:
成分
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规格
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PCR Mix 3.0,2×
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1.5mL
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DNase I溶液(1U/μL)
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10μl
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溶液A,10×
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60μl
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溶液B,10×
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60μl
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超纯水
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1mL
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说明书
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1份
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储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法:
1.待突变基因片段的制备:待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb,同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段,则彼此的比例为1:1),并且必须通过胶回收的方法回收,以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。zuì后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴,同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制,方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中,按顺序加入下列成分:
成分
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用量
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待突变基因片段(第1步制备)
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2μg
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溶液A
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5μl
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溶液B
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5μL
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DNase I工作液(第2步制备)
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2μL
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超纯水
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36μL
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4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟,然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳,用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意:一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围,zuì好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA,否则UV使DNA发生的交联将大降低后续扩增效果。
6.分光光度法测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行轮无引物PCR:
过程
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温度
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时间
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PCR前变性
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94℃
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150s
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PCR反应(40循环)
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94℃
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30s
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47.5℃
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45s
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72℃
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10s,每次循环后增加5s
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PCR后延伸
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72℃
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10min
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9.取5-10μl进行电泳检测,然后进行PCR回收,得到轮PCR产物。
10.将回收的轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
成分
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用量
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回收的轮PCR产物
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1μL
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PCR Mix 3.0,2×
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50μL
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自备DNA Shuffling引物
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各1μM
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超纯水
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加水到100μL
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11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
过程
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温度
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时间
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活化
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94℃
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150s
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PCR反应(25次循环)
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94℃
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30s
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47.5℃
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45s
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72℃
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60s,每次循环后增加5s
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PCR后延伸
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72℃
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10min
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12.电泳检测,回收预期大小的PCR产物,用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答:
Q:易错PCR和DNA Shuffling有何区别?
A:前者引入的是点突变,后者引入的是重组突变。示意图如下:
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