50T 鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50T

鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50T产品特性： 高特异性：本产品采用热启动 DNA 聚合酶，90℃以上 2min 后具有扩增活性，可大大提高 PCR 产物的特 异性。 灵敏度：鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50T包含的优化的缓冲液可检测低拷贝数的模板，且重复性好。 高适用性：本产品可适用于任意荧光定量 PCR 仪。

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荧光定量PCR原理：

荧光定量PCR早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。

产品名称	鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50T
英文名称	Abalone Spherical Virus
规格	50T

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50TPCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae燕麦镰刀菌 Gibberella avenacea

人脐动脉内皮细胞链霉菌 Streptomyces sp.

Daudi(人淋巴瘤细胞)泾阳链霉菌 Streptomyces jingyangensis

人支气管平滑肌细胞完全培养基宫颈

地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformisGH3, 大鼠垂体生激素腺瘤

凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa

香菇 Lentinula edodes苜蓿中华根瘤菌

薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri康宁木霉

SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum

LoVo(人大肠细胞)苏云金芽胞杆菌云南亚种 Bacillus thuringiensis subsp. yunnanensis

热带假丝酵母 Candida tropicalisA549/DDP, 人肺腺耐药细胞株

植物杆菌 Lactobacillus plantarum台湾根霉 Rhizopus formosensis

棉小丛壳 Glomerella gossypii黑木耳 Auricularia auricula
鲍球状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒50T细胞核提取试剂盒100T盒

8-Hydroxyquinoline 8-羟基喹啉25g瓶

L-Glutathione reduced 还原型谷胱甘肽5g瓶

Methyl eugenol 甲丁香酚93-15-220mg

20×SSC pH5.3100ml瓶

Ampicillin Trihydrate 氨苄西林三水合物7177-48-2200mg

兔抗豚鼠IgG-RBITC0.5ml支

Praeruptorin A 白花前胡甲素73069-25-720mg

10×丽春红10ml瓶

Germacrone 吉马酮6902-91-620mg

OLIGOMYCIN 寡霉素5mg瓶

牛IgG干粉10mg支

PPO 2,5-二苯基噁唑5g瓶
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

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