硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒 可见分光光度法

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒 可见分光光度法

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中文名称：硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒 可见分光光度法

测定方法：可见分光光度法

测定规格：50管/48样

保存条件：低温避光保存

有 效 期：６个月

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒 可见分光光度法本产品仅用于科研实验使用！

产品描述

硫氧还蛋白还原酶（TrxR）是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，能够催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

硫氧还蛋白还原酶能够催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，并利用2-乙烯吡啶抑制还原型谷胱甘肽与DTNB反应生成的TNB，TNB在412 nm处具有特征吸收峰，通过测定412 nm处吸光值增加速率即可表征硫氧还蛋白还原酶的活性。

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒 可见分光光度法产品使用说明

测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。

1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）

①组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1:（5-10）的比例（建议称取0.1 g组织，加入1 mL试剂一）处理样品，4℃ 10000 rpm离心10 min，取上清置于冰上待测。

②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为（500-1000）:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1 mL试剂一）处理样品，冰浴超声破碎（功率300 W，超声3 s，间隔7 s，总时间3 min），4℃ 10000 rpm离心10 min，取上清置于冰上待测。

③液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。

2.测定步骤

①分光光度计预热30 min以上，调节波长至412 nm，蒸馏水调零。

②试验前将试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热30 min。

③在1 mL玻璃比色皿中依次加入下列试剂：
试剂    测定管（μL）    空白管（μL）
试剂一    700    800
试剂二    100    100
试剂三    100    100
粗酶液    100    -

吸光值测定：①充分混匀并开始计时，测定10 s时412 nm处吸光值，记为A1测定和A1空白；②37℃恒温反应300 s，测定310 s时412 nm处吸光值，记为A2测定和A2空白；③计算∆A测定=A2测定-A1测定，∆A空白=A2空白-A1空白，∆A=∆A测定-∆A空白。注：空白管只需测定1-2次。

四、注意事项

①试剂一中含有约0.1 mg/mL蛋白，测定样品蛋白浓度时需减去提取液自身的蛋白含量；

②为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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