柠檬酸(CA)含量检测试剂盒 可见分光光度法

柠檬酸(CA)含量检测试剂盒 可见分光光度法

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中文名称：柠檬酸(CA)含量检测试剂盒 可见分光光度法

测定方法：可见分光光度法

测定规格：50管/48样

保存条件：低温避光保存

有 效 期：６个月
本产品仅用于科研实验使用！

柠檬酸(CA)含量检测试剂盒 可见分光光度法产品简介：

CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。酸性条件下，柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

柠檬酸(CA)含量检测试剂盒 可见分光光度法产品内容：

试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体0.1mL×1管，-20℃保存。

试剂四：粉剂×1管，室温保存。临用前配制，加入5mL试剂一，充分溶解。

试剂五：液体5mL×1管，4℃避光保存。

标准品：液体1mL×1管，1mmol/L 柠檬酸标准液，4℃保存；临用前稀释成250μmol/L柠檬酸标准液。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计、1mL比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品中柠檬酸提取：

1、液体样品中柠檬酸提取：取0.1mL液体加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。

2、组织中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，11000g/min 4℃离心10min，取上清液，待测。

3、线粒体中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA含量测定）；向沉淀中加试剂二 200μL，以及试剂三2μL，充分悬浮溶解，11000g/min，4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定操作：

1、分光光度计预热30min，调节波长到545nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置于30℃水浴中预热30min。

3、1.5mLEP 管中加入相应试剂

三、柠檬酸含量计算：

1、按液体样品的体积计算：

柠檬酸含量（mmol/L）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×样品稀释倍数

=2.5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

C标准液：250μmol/L=0.25 m mol/L；样品稀释倍数：（0.1 mL样品+0.9mL试剂一）÷0.1 mL样品=10。

2、按组织鲜重计算：

柠檬酸含量（μmol/g FW）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W

= 0.25×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷W

C标准液：250μmol/L；V总：上清液总体积，1.0 mL=0.001 L；W：样品质量，g。

3、按线粒体蛋白含量计算：

柠檬酸含量（μmol/mg prot）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷Cpr

=0.25×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷Cpr

C标准液：250μmol/L=0.25μmol/mL；Cpr：上清液蛋白质含量，mg/mL。

注意事项：

1、样品处理等过程均需要在冰上进行。

2、试剂四需现配现用，配置好的一周内使用完；

3、试剂五为易致癌物质，实验过程中，需佩戴手套，避免试剂五溅到皮肤上。

4、柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定需另取组织，用本公司BCA试剂盒进行测定。
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