BTN60904 一站式RNA电泳套装

一站式RNA电泳套装由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要一站式RNA电泳套装等核酸电泳和回收产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括一站式RNA电泳套装在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一站式RNA电泳套装
英文名称：One-Stop RNA Electrophoresis Pack
产品货号：BTN60904
产品规格：10次

本品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA上样液、电泳液等在内的RNA电泳套装，专门用于RNA电泳分析。可以进行至少10次mini变性胶电泳。

产品特点：
1. 即开即用，用户不需要自己进行RNase 灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2.与Northern杂交等后续反应兼容。

产品组成：

成分	规格
琼脂糖	5g
超纯水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但收到货后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打开需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，电泳槽，枪头等)均需去除RNase。强烈推荐使用本公司的的固相RNase 清除剂。

一、配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：琼脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 将琼脂糖加热融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS缓冲液，其瓶子一旦打开，就很容易产生污染细菌，细菌大量繁殖后会释放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待胶冷却至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自备EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本试剂盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果较差。如果使用自备的其他染料，如SYBR Green I，则不能同时使用其他染料，包括含EB的RNAload，用户需要另购不含EB的RNAload)。
4. 混匀后倒胶，凝固半小时后即可以使用。

二、配制电泳液
5. 将RNAep 用DEPC 水稀释十倍后即成电泳液，所需要的体积根据使用的电泳槽决定。

三、变性RNA样品
6.在一干净的离心管中将5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保温10分钟后冰浴5-10分钟，直接上样。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 总RNA进行Northern杂交，可以检测高丰度mRNA(占mRNA 总量的0.1%以上)；如待测RNA含量微，每个泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、电泳
7.电泳时，将凝胶预电泳5 min(电压为5 V/cm)。随后加样品和分子量对照(如果有的话)，以3－4 V/cm的电压电泳，直至染料迁移至胶下游的3/4处。
8.电泳结束后，在300nm 紫外灯下拍照。

五、后续处理
9. 按标准方法进行Northern杂交等后续处理。

使用效果：

图注: 用本产品电泳兔全血总RNA效果图。10μL 总RNA与15μL RNAload 混合后在甲醛琼脂糖变性胶上电泳0.5小时，直接在紫外灯下观察并照相。

疑难解答：
Q：RNA电泳为何zuì好使用RNAep，不要使用DNA电泳液TAE或TBE？
A：一是因为RNAep 经过去RNase处理，而一般实验室使用的TAE或TBE都没有经过去RNase处理，故有可能含RNase，使样品RNA 降解。即使要灭活TAE或TBE中的RNase 也十分麻烦，因为DEPC 不能处理含Tirs的缓冲液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羟基醇和糖的经典试剂，它能与RNA中含多羟基的核糖反应生成糖硼酸络合物，故电泳时RNA 带型十分弥散。在一定浓度范围内，RNA分子间还能通过硼酸形成分子间复合物，出现电泳时各种RNA以一条带的形式出现的现象。所以RNA电泳时要避免使用含硼酸的缓冲液。使用TAE效果虽然比TBE 稍好，但文献报道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分离某些大小不同的RNA分子。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。
使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼酸能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何我的植物RNA样品有4-5 条带？
A：部分植物组织有叶绿体等质体，而叶绿体有核糖体，所以也有其rRNA。
叶绿体的rRNA跟细胞浆里面核糖体的rRNA大小不同，所以一般会多出两条带(共4 条rRNA 条带)。小的tRNA和5S rRNA 有时可见，有时不可见，取决于回收效率。

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名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN90317
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。

产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。

产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级丙烯酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双丙烯酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过硫酸铵	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	zuì佳PAGE浓度	二甲苯青FF迁移率 对应的长度	溴酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1 克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级丙烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。

四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。

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货号	名称	规格
BTN70503Z	DNA marker(300-10000bp)	50次
BTN70908	PAGE胶DNA回收试剂盒	30次
RFT001	100bp DNA ladder(100～1500bp)	100T(2×250μl)
RFT012	15kb plus DNA ladder(250～15000bp)	100T(2×250μl)
RFT013	2kb DNA ladder(100～2000bp)	100T(2×250μl)
SY0249	溴化乙锭	1g

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