QN4080 Q-琼脂糖凝胶HP

Q-琼脂糖凝胶HP由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多Q-琼脂糖凝胶HP等分离试剂类产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括Q-琼脂糖凝胶HP在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Q-琼脂糖凝胶HP
英文名称：Q-Sepharose HP
产品货号：QN4080
产品规格：100ml

Q-琼脂糖凝胶HP是将季铵基团键合在琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。具有高分辨率，高载量，回收率高和再生能力强等特点。化学稳定性好，可用氢氧化钠在位清洗。基质的亲水特性保证在洗脱过程中减少细胞衍生杂质的非特异性吸附。可用于蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。


基质：6%交联琼脂糖凝胶
配基：季铵
交换基团：-N+(CH3)3
离子容量：0.14～0.20mmol Cl-/mL
颗粒大小：34μm
蛋白载量：10mg lgG，24mg HAS/mL
工作pH：1～14(短时间，在位清洗)；2～12(长时间)
化学稳定性：在以下溶液中稳定1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；30%异丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈
储存条件：4～28℃

使用方法：
1．装柱
① 将所有的试剂和填料达到室温，配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
② 根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶:缓冲液=3:1比例）配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2～3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2．平衡
  让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：Tris、PBS等。
3．上样
① 样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；
② 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度越小，介质对组分吸附越牢。
4．洗脱
  Q琼脂糖凝胶介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
5．再生
  一般用高盐浓度的缓冲液（含1～2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
② 对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质，可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4～10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
  清洗完毕后，用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
7．去热源
  用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5～6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除：
① 2倍柱体积的70%的乙醇；
② 2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5
③ 1倍柱体积4M尿素
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
  以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
8.消毒
  用0.5～1.0M NaOH室温下洗8-10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

注意事项：
1．密封贮存于4～28℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存于4℃（20%乙醇）。
2．在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

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储存条件：室温干燥保存

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规格：10ml
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产品参数：
基质：6%琼脂糖凝胶
配基：肝素
颗粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白结合量：10mg
操作温度：室温
保存条件：贮存于4℃～28℃（保存溶液为20%乙醇）

使用方法：
1．谷胱甘肽树脂的处理：
① 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
② 取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
③ 4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
④ 在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
⑤ 每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
2．制备细胞抽提物：
① 每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
② 加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
③ 用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
3．纯化融合蛋白：
① 细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
② 混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
④ 4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
⑤ 结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
② 4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
③ 重复步骤5和6两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
⑤ 4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
  试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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