鸡ＥＬＩＳＡ试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡 BAD 水平。用纯化的鸡 BAD 抗体包被微孔  板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入BAD，再与HRP标记的BAD抗体结合，  形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的BAD呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡BAD浓度。于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中BAD含量。其操作步骤及注意事项如下：
一、试剂盒操作步骤 
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照相关表格在小试管中进行稀释。
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
3、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。  
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。  
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。  
6、加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。  
7、温育：操作同 3。  
8、洗涤：操作同 5。  
9、显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10、终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。  
11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 
二、鸡ＥＬＩＳＡ试剂盒注意事项 
1、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。  
2、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。  
3、底物请避光保存。 
4、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。  
5、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。 
6、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
7、本试剂不同批号组分不得混用。 
8、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。  

9、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 

10、鸡ＥＬＩＳＡ试剂盒严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。