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羊肌酸激酶(CK)酶联免疫

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  • 更新日期:2016-07-07 10:45
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详细介绍
 羊肌酸激酶(CK)酶联免疫 双抗体夹心法测定标本中羊肌酸激酶(CK)水平。用纯化的羊肌酸激酶(CK)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌酸激酶(CK),再与HRP标记的CK 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌酸激酶(CK)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中羊肌酸激酶(CK)浓度。

 羊肌酸激酶(CK)酶联免疫 
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990 以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%
检测范围:
125ng/L -3500ng/L

羊肌酸激酶(CK)酶联免疫 

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在一、第二孔中分别加标
准品100μl,然后在一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从一孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,
浓度分别为3000ng/L,2000ng/L ,1000ng/L,500ng/L, 250 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
品终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。




 
 
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