● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管
底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清
洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用方法：
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
1、 取500mg-1g 丝状真菌样本，采用以下其中一种方法处理：
I． 加入3ml 提取液后用匀浆机/Dounce 匀浆器匀浆。
II． 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入3ml 冷的提取液 。
III． 加入3ml 提取液直接置冰上研磨。
2、 将匀浆用250 目细胞筛或3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在4℃，100×g 力条件
下离心1 分钟，收集上清，弃沉淀。
3、 将滤液700g 离心10 分钟，取上清。
4、 将上清11000g 离心20 分钟。
5、 弃上清，留沉淀。
6、 每200ul 蛋白提取液B 中加入1ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀。用200-400ul 蛋
白提取液B 重悬沉淀，在4℃条件下振荡20 分钟，至无明显沉淀。
7、 在4℃，14000g 条件下离心15 分钟。
8、 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌线粒体蛋白。
9、 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
注：
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。
② 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
