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ELISA试剂盒操作步骤

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  • 更新日期:2017-11-17 14:32
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详细介绍
ELISA试剂盒操作步骤:
1. 加规范品:在酶标包被板上设规范品孔,顺次参加不一样浓度的规范品50ul(主张每个浓度做2个平行孔)
2. 加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作一样)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。
7. 温育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
标本的处理方法:
(1)血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
(2)血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
(3)尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心,胸腹水、脑脊液参照实行。
(4)细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(5)组织标本:切割标本后,称取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷冻保存备用,标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
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