T4 DNA连接酶说明书
产品编号：BTN60609
规格：200U/1000U
产品及特点：
T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68 KDa的单亚基组成，它具有下列功能:
1. 催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5'-P末端和3' -OH末端之间形成磷酸二酯键。
2. 修复dsDNA反应中的切口（Nick）。
3. 催化pyrophosphate 和ATP之间的磷酸交换反应（Weiss酶单位定义原理）
4. 需要ATP、Mg2+ 和DTT，zui佳pH为pH 7.5-8.0。
5. NaCl 浓度在200 mM以上时有抑制作用。
6. 1 %-10% PEG和150-200 mM NaCl能促进连接反应（尤其是平末端DNA）效率。
规格及成分：
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成分 |
200U |
1000U |
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T4 DNA 连接酶（5U/μL） |
40μl |
200μl |
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10×T4 连接酶Buffer |
300μl |
1.5ml |
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说明书 |
1份 |
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注意：本公司本产品的单位按Weiss 单位定义，200个Weiss单位相当于25000个连接单位，1000 个Weiss 单位相当于125000个连接单位。
保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
DNA片段和载体DNA的连接
1. 在微量离心管中制备下列连接反应液
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10×T4 DNA Ligase Buffer |
2.5 μl |
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自备插入DNA 片段 |
约0.3 pmol |
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自备载体DNA |
约0.03 pmol |
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T4 DNA Ligase |
1 μL |
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dH2O |
up to 25 μL |
2. 16℃过夜反应
3. 加入2.5 μL 的3 M 醋酸钠（PH5.2）
4. 加入62.5 μL 的预冷无水乙醇，-20℃放置30-60 分钟
5. 离心回收沉淀，用70%的预冷无水乙醇清洗沉淀，真空干燥
6. 25-50 μL TE 溶解，10-20 μL 转化至100 μL 感受态细胞中。
