BTN60706 一管式DNA胶回收试剂说明书

一管式DNA胶回收试剂说明书

产品编号：BTN60706

规格：30T/100T

产品及特点：

本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA 的产品，也堪称zui快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3 左右。本产品也可以用于单双链RNA胶回收。

1. 超快，整个过程不到15分钟(对一个样品而言)，由溶胶（3分钟），放置（2分钟），沉淀（5分钟）和两次洗涤（各1-2分钟）几步组成。

2. 纯度高，回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应，不影响后续酶反应。

3. 回收率高，一般大于50%。

4. 适用范围广，可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA 片段（一般在100 bp-50 Kb 之间），而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb 的片段。

5. 一管式操作，不需要任何样品转移步骤，使大片段DNA 保持完整，同时减少了污染的可能。

6. 既可用于回收单双链DNA，又可用于回收单双链RNA。

7. 扩容性好，可以在一个离心管中（包括15 mL 或50 mL 离心管）进行大规模回收，没有zui大吸附量的限制；而柱式胶回收试剂都受zui大吸附量的限制。

8. 本试剂盒足够50次0.1g琼脂糖凝胶的胶回收。

规格及成分：

保存条件：

常温运输, 4℃保存，有效期一年。

核酸沉淀液呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH 已经改变，请弃之不用。核酸沉淀洗涤液为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，避开沉淀直接取上清液使用。

自备试剂：

TE 或超纯水。

使用方法：

1. 从琼脂凝胶上切下目的 DNA 片段，放入 1.5 mL 离心管中。尽可能多地去掉不含DNA 的胶。如果方便zui好称重以便估计需要的溶胶液（空的1.5 mL 离心管EP 约0.9 克，一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右）。

2. 按0.1 克胶加300 μL 通用溶胶液的比例加入通用溶胶液，65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用，溶化胶的时间可能需要延长。

3. 待胶完全溶化后，按0.1 克胶加100 μL 核酸沉淀液的比例加入核酸沉淀液,充分混匀。如果回收20 Kb 以上的DNA 片段，混匀时需要温和震荡；对20 Kb 以下的DNA 片段，可以剧烈震荡。

4. 室温静置至少2分钟，此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键，不能省略而直接离心。

5. 13000 g 室温离心5分钟后, 小心吸弃上清，管底将有黄豆大小的红色沉淀。

6. 加入0.8 mL 核酸沉淀洗涤液，充分震荡混匀。注意：核酸沉淀洗涤液瓶底有晶体状沉淀，用前无需溶解，但取用核酸沉淀洗涤液时需要避开沉淀。

7. 13000 g 室温离心2分钟，小心吸弃上清，管底将有芝麻大小的白色沉淀。

8. 再用0.2 mL核酸沉淀洗涤液重复第6-7 步一次，管底还有芝麻大小的白色沉淀。

9. 小心吸弃上清后即得纯化的DNA 沉淀，加入少量TE 或水，充分吹打溶解。zui后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：

Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？

A：zui可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是通用溶胶液和核酸沉淀液的pH发生改变。

Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？

A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取DNA 样品时zui好短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID 的琼脂糖，得到的DNA 可以用于常见的分子生物学后续反应。