BTN60801 柱式腐殖酸清除剂说明书

柱式腐殖酸清除剂说明书

产品编号：BTN60801

规格：30T/100T

产品及特点：

用大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用百奥莱博的土壤DNA提取试剂盒从泥碳（腐殖酸含量超过50%）等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它们往往对PCR等后续反应有大的抑制作用。本产品专门用于从土壤DNA样品中清除腐殖酸污染。

1.去污染效guo好，能使腐殖酸的浓度降低10倍以上。

2.DNA回收率高，一般都在80%以上。

3.操作过程简单快速，只需要10分钟。

4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。

5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于PCR。

规格及成分：

保存条件：

常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：

1.将0.3 mL专用上柱液与50 μL或50 μL 以下的含腐殖酸的DNA溶液轻柔混匀。如果DNA溶液体积超过50 μL, 专用上柱液的体积需按1:6 (DNA溶液:专用上柱液) 的比例相应增加。不要剧烈震荡，否则DNA容易断裂。

2. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，放于离心管架上，静置3-5分钟，12000-15000 g离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。

3. 加入0.5 mL通用洗柱液于离心柱中，12000-15000 g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。

4. 重复第3步操作1次。

5. 12000-15000 g离心1分钟以去除离心柱中的残留液体。

6. 将离心柱置于一新的干净的离心管（自备）中，加入50 μL通用洗脱液，静置3-5分钟，12000-15000 g离心1分钟。

7. 离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

使用效果：

图注：从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的颜色对比。处理前OD340为4.0（4为所用分光光度计的上限，实际读数可能远高于4），处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增，而处理后均可以扩增。

疑难解答：

Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？

A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测zui大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。

Q: 腐殖酸的zui大吸收波长是多少？

A：腐植酸（humic acid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其zui大吸收波长也各不相同。有的土壤的腐殖酸的zui大吸收波长在260 nm（见Appl. Environ. Microbiol., 63：4993, 1997），有的则在340 nm，所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma, Fluka等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其zui大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。

Q: 是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？

A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响zui好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的DNA）能够发生，说明可能有抑制作用。

Q：除本方法外，还有什么有效方法去除DNA样品中的腐植酸？

A：可以先电泳，然后用片段胶回收试剂Magic Gel DNABACK（BTN60706）纯化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接扩增。

Q：本产品与柱式DNABACK有何区别？

A：本产品由柱式DNABACK改进而来，主要区别一是使用了不同的上柱液，减少了硅胶膜对DNA的非特异吸附，更适用于微量DNA样品；二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂，适合于土壤DNA样品。

Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？

A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。