粪便DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN70601
规格：30T/100T
产品及特点：
动物粪便中夹杂着许多脱落的肠道上皮细胞和肠道病原菌，因此通过PCR 对粪便DNA 进行分析是诊断肠道遗传病(如大肠癌等)和传染病的重要材料, 具有比常规的结肠镜检测和大便隐血实验更高的特异性和灵敏度。通过PCR 对粪便DNA 进行分析还可以对濒危物种进行遗传分析。但粪便中成分复杂多变，常含有对PCR等后续反应有大的抑制作用的不明成分，所以从粪便中提取高纯度的DNA 十分棘手。
本产品是专门用于从各种动物粪便中提取高质量的DNA的试剂。
1. DNA 纯净，OD260/280 一般都在1.8以上，得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR 等后续反应。
2. 每次微量提取可以处理100-300mg 左右的样品，能得到5μg左右DNA，片段长度在30Kb左右。
3. 可以同时提取到肠道上皮细胞和肠道病原菌的DNA。
4. 操作过程简单快速，只需要30 分钟。
5. 扩容性好，既可以在1.5 mL 离心管中微量提取，也可以在50 mL 离心管中进行大规模制备。
6. 试剂无害, 环保。
规格及成分：
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成分 |
30T |
100T |
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溶液A |
15ml |
50ml |
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溶液B |
15ml |
50ml |
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说明书 |
1份 |
1份 |
注：溶液A 和溶液B 均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。
保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：
氯fang、无水乙醇、75%乙醇。
使用方法：
下面的操作步骤为1.5mL 塑料离心管中进行的微量提取。如果样品用量增加，需要使用大的离心管，各提取试剂的用量也需要按比例增加。
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，然后取0.5 mL 加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。zui好使用螺旋盖离心管。
2. 取0.1-0.3 g 的新鲜或冷冻的动物粪便，加入到含预热溶液A 的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10 分钟。注意:一定要让管底的样品充分震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5 分钟。
4. 13000-15000 g 室温离心3 分钟，将上清转移到一新的1.5 mL 塑料离心管中。
5. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30 秒使之充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5 分钟。
7. 13000-15000 g 室温离心3 分钟，转移上清到新的1.5 mL 塑料离心管中。
8. 加入0.2 mL 的氯fang(自备)，震荡器上充分振荡30 秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 13000-15000 g 室温离心3 分钟，小心转移上清到新的1.5 mL 塑料离心管中。
10. 重复第8 步和第9 步一次。
11. 将上清转移到新的1.5 mL 离心管时，不要超过0.5 mL，否则没有空间加两倍体积的乙醇。如果有多余的可以弃之不用。
12. 加入2 倍体积的乙醇(自备)，上下颠倒30 秒混匀，15000 g 离心5-10 分钟，弃上清，管底将有微小DNA 沉淀。注意：zui好不要用异丙醇代替乙醇，否则不容易去除带色素的杂质。
13. 加入1mL 75%乙醇（自备），震荡数秒，13000-15000 g 室温离心3 分钟，弃上清。
14. 重复上步清洗一次。注意：75%乙醇洗两次有助于去除PCR 抑制物。
15. 短暂离心，吸弃残留的75%乙醇（约50μL），室温晾干。注意：一定要去除残留的75%乙醇，否则会影响后续反应和电泳上样（样品会飘走）。
16. 加入30 μL TE 缓冲液溶解沉淀。注意：不知道样品DNA 产率前zui好不要加过多TE。如果DNA 浓度高，可以再加TE 稀释。如果DNA 有颜色,可以使用柱式腐殖酸清除剂（BTN60801）纯化一次。
17. DNA 即可用于电泳、酶切和PCR 等反应。zui好用原液和稀释液对照做PCR，
zui好按PCR 终体积的1/10 加入随赠的PCR 抑制物清除剂（BTN60804）。
