Instruction manual
hFOB 1.19 人 SV40 转染成骨细胞
Catalogue No.: C022
Product Format: a T25 flask
Culture Properties：贴壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Compo
Item Specifications
a T25 flask 2X106
Manual 1 copy
Operation steps for cell culture
1. 吸走用于培养基，加入 3-5mL PBS 后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
2. 吸干净 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表
面，培养瓶放 37 度培养箱消化；
（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或
者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止
消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）
3. 加入 6-8ml 完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
4. 将混匀的细胞 1000rpm（约 150g）离心 3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬 37 度培
养箱继续培养；
传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用
1:3-1:4 传代，生长较慢的细胞可以 1:2 传代。
Cell cryopreservation
1.冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）
2.降温步骤：4 度 10min，-20 度 2h，-80 过夜后液氮保存。Instruction manual
Tips：
1. 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞
可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约 150g)离心 3min，弃上清。加 5ml
PBS 重悬细胞，再 900-1000rpm(约 150g)离心 3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培
养瓶。第二次 PBS 重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略 PBS 重悬的步
骤；如果碎片很多，建议 PBS 多洗几次。
2. 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
3. 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（Z高不超过 20%），也可以根据细胞生长状态，
选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。
4. 不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min 均有可能，具体以细胞消化到
相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂浮。客户消化过度导致细胞死
亡、漂浮、生长缓慢，不提供售后服务。
5. 干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若
客户同时复苏两支均状态不佳，我方不提供售后服务。
6. 细胞状态正常时，应尽快冻存细胞保种，冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。我方不对客户冻
存细胞导致死亡负责，客户冻存细胞死亡不提供售后服务。
Notice：
客户收到细胞有任何疑问请及时致电我们，细胞收到后 1 周内没有任何电话，或其他形式回访，
默认为细胞质量没问题，之后出了任何问题不给予售后。细胞售后只提供一次，若重发后再
次培养死亡不再补发，细胞收货时已经死亡或密度不足的除外。
