超氧化物歧化酶(SOD)提取试剂实验步骤

中文名称:超氧化物歧化酶(SOD)提取试剂

储存条件：4℃，12个月

产品规格：500ml

用途：超氧化物歧化酶(SOD)提取液主要用于裂解组织样本、细胞样本，提取样品中的过氧化物酶。该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品简介：超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金属辅基的酶，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。由于超氧自由基是不稳定的的自由基，寿命极短，SOD活性一般用间接方法测定，并利用各种呈色反应来测定SOD活力，其中显色剂有NBT(四氮唑蓝)、WST-1、WST-8等。

实验步骤：
1．酶液制备
称取植物组织0.5g先加入2.5ml PBS，研磨匀浆后，再加入2.5ml PBS混匀，4℃下 10000r/min离心15min 上清液即为粗酶液。取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。
2.酶活性测定
取10ml小烧杯7只, 3只测定样品,4只作为对照，将试剂混匀后，1只对照烧杯至于暗处，另3只对照烧杯和样品一起置于4000lx日光灯下反应20min（要求各管受光一致，温度高时时间缩短，温度低时可适当延长）。zui后在560nm处测定反应液的光密度。以不照光的对照烧杯作参比，分别测定其他各管的光密度。
3.蛋白含量的测定
步骤1的上清液经适当稀释后用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量.

实验原理：
植物体内的黄素氧化酶类代谢产物常包含H2 02 ，如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中 的葡萄糖氧化酶等。H2 02 的积累可导致破坏性的氧化作用。过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)是清除 H2 02 的重要保护酶，能将H2 02 分解为02 和H2 0, 从而使机体免受H2 02 的毒害作用。其活性与植物的抗逆性密切相关。
(CAT)催化如下反应：
2 H2 02 →2 H2 0 + 02
本实验通过测定H2 02 的减少量来测定CAT的活性。
在H2 02 存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚。可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。

实验结果及计算：
CAT和POD的酶活性以U/mg蛋白或U/gFW表示。