MTT溶液(5mg/ml)操作步骤

中文名称：MTT溶液(5mg/ml)
产品规格：5mL|10mL
用途：又称四氮唑盐，常用于细胞增殖及细胞毒性检测
注意事项：主要由MTT\四氮唑盐组成。
储存条件：-20℃，避光，12个月

简介：MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂(如DMSO)存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

操作步骤：
1、细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。
2、低速离心，收集细胞沉淀。
3、用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4、细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000～10000 /孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5、37℃5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6～24h。
6、按照实验具体要求，给予0～20μl干预药物处理，37℃5%CO2继续培养至合适时间。
7、弃培养液，每孔加入MTT solution和新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育。
8、弃培养液，每孔加入DMSO，置摇床上低速振荡，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。
9、在酶联免疫检测仪570nm测定各孔吸光度。


注意事项：
1、MTT+solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。
2、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。