DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)注意事项

【产品名称】DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
【规格】10ml
【分类】细胞其他
【储存条件】-20℃,6个月
【用途】转染DNA到细胞中
【注意事项】主要由DEAE-葡聚糖、TBS组成。

简介：将DNA导入细胞的方法很多，采用DEAE-葡聚糖转染法主要优点是相对简单、快速、同次试验内和不同次实验间的重复性较好，该法尤其适用于瞬时转染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶剂溶解，经过滤除菌，临用前37℃保温并充分混匀。

操作步骤(仅供参考)：
1、取对数生长期的细胞，制备成细胞悬液。将细胞密度调整到5×105个/ml接种至6孔板，培养12～24h。
2、用蒸馏水或TE将质粒DNA稀释，将DNA溶液直接加到转染培养液至其终浓度为1.0μg/ml。
3、将DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)预热并颠倒混匀，加到DNA/转染培养液使DEAE-葡聚糖终浓度为100μg/ml，蕞适浓度需要自行摸索。
4、将50～70%汇片的细胞培养物中的培养液轻轻吸出，换上适合体积的补充有DEAE-葡聚糖/DNA/转染培养液孵育。
5、倒置显微镜下观察细胞，细胞内会出现颗粒，有的细胞核出现固缩，有的细胞边缘出现部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖转染常伴有25～75%的细胞死亡。
6、换用100mmol/L氯喹培养液继续培养，进行下游实验。

注意事项：
1、某些特点细胞需要较长的转染时间，因为氯喹有细胞毒性，可在转染的蕞后时期加入。
2、转染时，摇动细胞可保障转染效率均一，蕞适转染时间需通过实验确定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。