磷酸钙法细胞转染试剂盒操作步骤

中文名称：磷酸钙法细胞转染试剂盒
英文名称：Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
产品规格：200T
储存条件：-20℃，有效期12个月。
用途：用于磷酸钙法转染细胞,适合于大多数贴壁细胞的转染

本试剂盒是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。本试剂盒足够转染不少于200个细胞样品。

试剂盒组分：
BBS溶液————————20ml
氯化钙溶液———————20ml

HEK293或HEK293T细胞，即通常所谓的293细胞，是蕞适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达90%以上；通常很容易达到40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。

本试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染，也适用于一些悬浮细胞的转染。本试剂盒提供的试剂都经无菌处理，可以直接使用。

注意事项：
1. 转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。
2. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
3. 在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的蕞佳浓度为3%左右。
4. BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。
5. 转染时由于质粒不同、细胞不同，蕞佳的质粒用量需自行摸索。