哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒操作步骤

产品名称：哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒
分类：核酸提取
用途：本试剂盒采用了经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组DNA。用本试剂盒抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。
保存：-20℃,避光,12个月

规格说明：
通常使用本试剂盒，从20mg组织可以抽提到约40μg基因组DNA，从106～107Hela细胞可以抽提到约5～50μg基因组DNA。本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。

注意事项：
1.需自备Tris平衡苯酚、和无水乙醇。
2.如果打算抽提到大片段的基因组DNA，则要尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA的样品。
3.不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。

使用方法：
1、样品收集
1.对于组织样品：
切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
2.对于贴壁细胞：
胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000～2000g离心1～2分钟，弃上清，收集细胞。
3.对于悬浮细胞：
1000～2000g离心1～2分钟，弃上清，收集细胞。

2、基因组DNA抽提
1.样品处理完毕后，每1mL样品裂解液中加入5μL蛋白酶K，混匀。
2.对于上述处理好的样品，每20mg组织或106～107个细胞中加入500μL添加了蛋白酶K的样品裂解液，颠倒混匀数次，充分裂解组织或细胞。
3.50℃水浴消化过夜。
4.加入500μL Tris平衡苯酚抽提样品。
5.吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。
6.吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积再抽提一次。
7.吸出约300μL上清液，加入60μL 10M醋酸铵和600μL无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。
8.10000g离心1分钟，弃上清。加入70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。
9.尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50～100μL Nuclease Free Water溶解DNA。
注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。