Super ECL Plus超敏发光液使用说明

产品名称：Super ECL Plus超敏发光液
产品分类：蛋白其他
产品规格：50ml/100ml/500ml
储存条件：4℃,避光,
有效期：12个月
用途：Western blot免疫印迹等印迹发光显色
注意事项：ECL是基于Luminol的新一代增强型化学发光底物试剂,它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应,发出荧光。溶液A主要成分为Luminol及特制发光增强剂。溶液B主要成分为H2O2及特殊稳定剂。

产品简介：
Super ECL Plus 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。
1. 可使用高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体；
2. 简单易用：可替代其它公司的 ECL 发光底物，操作步骤无需进行特别优化；
3. 灵敏度高：可检测低皮克级的蛋白；
4. 信号持续时间长：光信号持续时间长达 5 小时；
5. 多成像方法：适用于 X 射线胶片、CCD 或激光成像仪；
6. 价格经济：相比其他品牌的类似产品，不仅具有高品质和高性能，同时价格也低。

使用说明：
1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP 夹法。
操作概述：
注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。
1) 将一抗浓度稀释到 0.05～1ug/ml
2) 将二抗浓度稀释到 0.005～0.04ug/mL
3) 将两种底物组份按 1:1 比例混合，制备底物工作液。
注：暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液，为获得佳结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。
4) 将印迹膜在 ECL 底物工作液中孵育 5 分钟。
5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。
6) 使印迹膜在 X 光胶片上曝光。

2. Western Blot 后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液 A 和 B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液（0.125mL 发光工作液/cm2膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育 3 分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
5. 打开 X 光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6. 暗房内压 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。

注意事项：
1. A 液和 B 液在吸取过程中必须要换枪头，上述试剂相互污染后会导致 A 液或 B 液逐渐失效，影响后续的使用效果。
2. 步骤 1～5 可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
3. 为获得佳实验效果，应注意优化实验条件，包括实验检测样品的用量、一抗稀释度、二抗稀释度、杂交膜及封闭液的选择等。
4. 当使用亲和素/生物素系统时，应避免使用含有脱脂奶粉的封闭液。
5. 洗涤液、封闭液、抗体稀释液、ECL 工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。
6. NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。
7. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖以防失效。
8. 发光工作液孵育约 3min 后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。荧光持续时间很长，但开始反应后的 30min 内荧光强一些，随后荧光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的 30min 进行曝光或成像仪检测。
9. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
10. 由于发光液极其灵敏，建议抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
11. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
12. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可确定胶片上条带的位置和大小。
13. A 液和 B 液均对人体有害，操作时请注意适当防护。
14. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
15. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。