名称 编号 R31918 50T Storage
试剂(A):VitaminB1标准(100μg/ml) 1ml 4℃避光
试剂(B):组织匀浆液(10×) 250ml RT
试剂(C):样品校正液 100ml RT
试剂(D):沸石 100g RT
试剂(E):样品洗脱液 500ml RT
试剂(F):VitaminB1氧化液 120ml RT
试剂(G):VitaminB1检测液 30ml RT避光
试剂(H):硫酸盐 100g RT
试剂(I):亚硫酸盐 3×100mg RT
使用说明书 1份
保质期::6个月有效;4℃运输,4℃保存。
产品简介:
维生素B1(VitaminB1)又称硫胺素,属于水溶性维生素,在有氧化剂存在时容易被氧化产生脱氢硫胺素,后者在有紫外光照射时呈现蓝色荧光。
维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)是利用VitaminB1水溶液在碱性盐溶液中能被氧化成蓝色的硫色素(一种荧光化合物),在紫外线下硫色素发出荧光,在激发波长365nm,发射波长435nm,在没有其他荧光物质干扰时荧光强度与硫色素的浓度呈正比,可定量检测维生素B1的含量,如果样品中存在干扰物质,可用沸石吸附VitaminB1,以便去除待测样品中干扰荧光测定的杂质。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、蒸馏水
2、pH计
3、离心管或试管
4、正丁醇
5、荧光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、稀释组织匀浆液:按组织匀浆液(10×):蒸馏水=1:9的比例稀释,获得1×组织匀浆液。
2、稀释标准品:取适量的VitaminB1标准(100μg/ml),按VitaminB2标准(100μg/ml):蒸馏水=1:99稀释成VitaminB1标准(1μg/ml),4℃避光保存。
3、制备亚硫酸盐工作液:取一支试剂(I)-亚硫酸盐100mg粉末,充分溶解于0.5ml蒸馏水中配制成200mg/ml的亚硫酸盐工作液,即配即用。
4、(选做)制备样品:取待测材料如麦麸等,准确称量2~5g,加入研磨器内,加入少量1×组织匀浆液,研磨碎,再次用1×组织匀浆液研磨,后一并倒入50ml离心管,补充1×组织匀浆液至25ml,充分混匀,沸水中孵育30min,冷却至室温,用样品校正液调节pH至4.5,3500g离心10min,取上清加入2g沸石,振摇30min,弃液,蒸馏水清洗沸石2次,弃洗液,加入2.5ml样品洗脱液搅拌沸石,洗脱2~3次,将洗脱液合并,并用样品洗脱液定容至10ml,即为样品净化液。VitaminB1氧化:按下表操作,注意避光操作。
加入物(ml) 空白管 测定管 标准空白管 标准管
VitaminB1标准(1μg/ml) - - 2.5 2.5
样品净化液 2.5 2.5 - -
VitaminB1氧化液 1.5 0.9 1.5 0.9
VitaminB1检测液 - 0.6 - 0.6
振摇15s
正丁醇 5 5 5 5
剧烈振摇90s,静置分层,吸取下层溶液丢弃;上层溶液加入1.5g硫酸盐混匀使脱水。
VitaminB1检测:选用恰当的滤色片,测定的激发波长为365nm,发射波长为435nm,
提前预热仪器30min,分别检测测定管和标准管的荧光值,同时向空白管和标准空白管的
剩余液中加入0.05ml亚硫酸盐工作液,立即混匀,在20~30s内测出各管的荧光值,作为
各自的空白值。
计算:
VitaminB1含量(mg/100g)=(A测定-A空白)×S×N×100/{(A标准-A标准空白)×m×1000}
式中:A测定=测定管的荧光值
A空白=空白管的荧光值
S=标准管中VitaminB1含量(μg)
N=稀释倍数
A标准=标准管的荧光值
A标准空白=标准空白管的荧光值
m=样品的质量(g)
注意事项:
1、在上述操作中,要严格避免VitaminB1受到阳光直射。
2、待测样品如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、如果样品浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。