果胶酶检测试剂盒(DNS比色法)
保质期:：6个月有效；4℃运输，4℃保存。
产品简介:
天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。果胶酶(Pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称，实质是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
果胶酶(PG)检测试剂盒(DNS比色法)检测原理是果胶酶水解果胶生成β-半乳糖醛酸，与二硝基水杨酸(DNS)反应形成有色化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比，于分光光度计540nm处测定吸光度，通过与标准曲线比较计算出样品中果胶酶活性，主要用于定量检测植物组织或果实中果胶酶，反应颜色越深，吸光度越大，果胶酶的活性越强，该50T试剂盒可以检测约23~24次样本。
该试盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料：
1、蒸馏水
2、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
3、研钵或匀浆器
4、离心管或试管
5、离心机
6、水浴锅
7、比色杯
8、分光光度计
操作步骤(仅供参考):
果胶酶提取：取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品3g，置于提前4℃预冷的研钵或匀浆器，加入3ml4℃预冷的PectinaseLysisBuffer，充分研磨或匀浆后转入离心管或试管，4℃10000g离心10min，留取上清液，即为果胶酶提取液，
4℃保存待用。稀释半乳糖醛酸标准液：取适量的半乳糖醛酸标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：
加入物(ml) 1 2 3 4 5
半乳糖醛酸标准(1mg/ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
蒸馏水 0.49 0.48 0.47 0.46 0.45
半乳糖醛酸含量(μg) 10 20 30 40 50
PG加样：按照下表设置空白管、标准管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。如果样品中的果胶酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测好能设置2平行管，求平均值。
加入物(ml) 空白管 标准管 对照管 测定管
蒸馏水 0.25 - - -
半乳糖醛酸标准(1~5号管) - 0.25 - -
果胶酶提取液 - - 0.25(提前煮沸5min) 0.25
Pectinase Lysis Buffer 0.75 0.75 0.5 0.5
Pectinase Assay Buffer 0.25 0.25
37℃水浴1h。
DNS显色液 0.75 0.75 0.75 0.75
PG测定：立即沸水浴5min，自来水中将离心管或试管冷却至室温，以蒸馏水稀释至12.5ml，混匀，比色杯光径1cm，以空白调零，以分光光度计立即系列标准管、对照管、测定管在540nm处吸光度。
计算：
以1~5号管系列半乳糖醛酸标准(10、20、30、40、50μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线，直接计算直线回归方程。以测定管吸光度减去对照管吸光度的差值作为测定吸光度值(A测定)，带入回归方程求得的测定管果胶酶含量，根据下述公式计算其活性：
组织样品的果胶酶活性(μg/h.g)={m×V}/(W×t×VS)
式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量(μg)
V=果胶酶提取液总体积(ml)
W=样品鲜重(g)
t=37℃水浴时间(h)=1
Vs=测定时所取果胶酶提取液的体积(ml)=0.5
液体样品的果胶酶活性(μg/h·ml)=m×N/V
式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量(μg)
N=稀释倍数
V=测定时所取果胶酶提取液的体积(ml)=0.5
注意事项：
1、取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。
2、可溶性糖对测定结果有较大影响，应彻di去除样品中的可溶性糖。
3、PectinaseLysisBuffer应密闭保存，避免有效成分挥发。
4、37℃水浴1h后，应立即加入DNS显色液。
5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的大检测体积。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
