植物总酚检测试剂盒(比色法)产品简介:
植物组织或果实中存在花青素、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、酚类等物质,这些物质与果实等样品衰老过程密切相关,对其加工性能、存储、营养价值等都有重要影响,植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
植物总酚检测试剂盒(比色法)检测原理是总酚(Total
Phenol)溶于有机溶剂,以有机溶剂粗提总酚,根据提取液的吸收光谱特性,可利用分光光度计在特定波长(280nm)处测定其吸光度,通过与标准曲线比较,计算出总酚含量,主要用于植物组织或果实中总酚的提取以及定量检测总酚含量。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、实验材料:桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
2、天平、称量纸、剪刀、研钵或匀浆器、离心管、离心机、滤纸或纱布
3、石英比色杯、紫外分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、总酚提取:
①取果实或其他植物组织,洗净,擦干,称取剪碎的新鲜样品0.25g,置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的2~3mlTPAssayBuffer,充分研磨或匀浆后转入10ml离心管,用
TPAssayBuffer冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管,补加TPAssayBuffer至8ml。
③4℃避光静置20min,期间摇动2~3次,然后过滤至离心管中,也可用离心机8000r/min离心3min,滤液(上清液)即为总酚粗提液。
稀释总酚标准溶液:将总酚标准(1mg/ml)用TPAssayBuffer稀释成总酚标准(50ug/ml),取干净离心管或试管,按下表进行操作,依次稀释。
加入物(ml)123456 1 2 3 4 5 6
总酚标准(50ug/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
TP Assay Buffer 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
总酚标准(50ug/ml) 5 10 15 20 25 30
3、TP加样:按照下表设置空白管、对照管、测定管;如果样品中的总酚浓度过高,可以
减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测好能设置2平行管,求平均值。
加入物(ml) 空白管 标准管 测定管
TPAssayBuffer 1 - -
系列总酚标准(1~6号管) - 1 -
总酚粗提液 - - 1
注意:如用较大的比色杯,可相应增加试剂量,其后计算公式中V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)应相应发生变化。
4、TP测定:各管试剂加入光径1cm的石英比色杯中,在5~15min内,以空白管调零,用紫外分光光度计280nm处测定系列标准管、测定管的吸光度。
计算:
以1~6号管系列总酚标准浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,进而计算出各测定管总酚含量(mg/ml)。
组织样品的总酚(mg/g)={C×VT}/(W×V1)
式中:C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
VT=总酚粗提液总体积(ml)=8
V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=1
W=样品鲜重(g)
液体样品的总酚(mg/ml)=C×N/V
式中:C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
V=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=1
N=稀释倍数
注意事项:
1、为了避免总酚见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2、取样量、试剂用量应根据总酚含量适当调整。
3、TPAssayBuffer应密闭保存,避免有效成分挥发。
4、测定时,比色皿上应加盖,防止挥发。
5、测定应及时,时间延长,总酚浓度高时,测定结果可能偏低。
6、植物总酚浓度在10~20ug/ml范围是,OD值基本稳定,超出范围时结果有稍微变化。
7、如果没有分光光度计,也可以使用酶标仪测定。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。