英文名称:HumanInterleukin2,IL-2ELISAkit
规格:48T/96T
储存温度::-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)
有效期:6个月
产品供应商:上海远慕生物
本试剂盒仅供科研实验使用!
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中样本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中样本浓度。
ELISA各种样本收集、处理、保存方法
1.血清标本收集、处理、保存方法:
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,全血标本室温放置1-2h或4℃过夜,然后4℃、3000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
2.血浆标本收集、处理、保存方法:
根据样本要求选择EDTA或肝素钠或枸缘酸钠作为抗凝剂,用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,室温混合20min左右,然后4℃、3000rpm/min离心20min,小心收集上清即为血浆。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
3.尿液标本收集、处理、保存方法:
用干净容器收集尿液,4℃、3000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
4.唾液标本收集、处理、保存方法:
用干净离心管收集唾液,4℃、3000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
5.细胞标本收集、处理、保存方法:
(1)细胞培养上清
取细胞培养上清到干净离心管中,4℃、3000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
(2)细胞裂解液
收集细胞培养液,4℃、3000rpm/min离心20min,弃去上清,用预冷的PBS(0.01M,PH7.4)洗涤三次。加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通过反复冻融,使细胞充分裂解。然后4℃、10000rpm/min离心20min,除去细胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
6.植物标本收集、处理、保存方法:
取适量大小组织块(一般0.2-0.5g),用预冷的PBS缓冲液(0.01M,PH7.4)漂洗三次,滤纸拭干水分。准确称重,放入匀浆管中,加入4倍体积的匀浆介质(0.05mol/LTris-HCl,pH7.4PBS缓冲液)于匀浆管中,冰水浴条件下,剪碎组织块,手工匀浆或机器匀浆,制成匀浆液。4℃、10000rpm/min离心20min,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
7.粪便标本收集、处理、保存方法:
采集时用干净的竹签挑取粪便样本到离心管中,向离心管中加入适量PBS缓冲液(0.01M,PH7.4),搅拌均匀。然后4℃、10000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
8.组织标本收集、处理、保存方法:
将组织样本用PBS缓冲液(0.01M,PH7.4)冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。将组织块称重,记录后剪碎(碎块尽量小)。将组织按一定的比例(通常组织重量:PBS体积=1:9)加入预冷的PBS缓冲液(临用前加入蛋白酶抑制剂)中匀浆,匀浆时置于冰上。吸取匀浆液到离心管中,4℃、10000rpm/min离心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
注意事项
1.ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。