英文名称：Human leptin receptor (lr/ob-r) ELISA Research Kit
产品规格：48T/96T
产品用途：科研实验
产品存储：2-8℃，有效期六个月
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗体，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
组成
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1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
7 |
终止液 |
6ml×1瓶 |
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2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
8 |
标准品（480pg/ml） |
0.5ml×1瓶 |
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3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
9 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
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4 |
样品稀释液 |
6ml×1瓶 |
10 |
说明书 |
1份 |
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5 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2张 |
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6 |
显色剂B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
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240pg/ml |
5号标准品 |
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
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120pg/ml |
4号标准品 |
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
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60pg/ml |
3号标准品 |
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
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30pg/ml |
2号标准品 |
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
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15pg/ml |
1号标准品 |
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
