人可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA试剂盒操作步骤

中文名称：人可溶性白细胞分化抗原40配体(SCD40L)ELISA试剂盒
英文名称：Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA Kit
产品存储：2-8℃
有 效 期：6个月

实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样本，再与HRP标记的)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中指标浓度。

试剂盒组成:
1,30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶         7,终止液               6ml×1瓶
2,酶标试剂      6ml×1瓶         8,标准品               0.5ml×1瓶
3,酶标包被板     12孔×8条         9,标准品稀释液     1.5ml×1瓶
4,样品稀释液      6ml×1瓶        10,说明书              1份
5,显色剂A液      6ml×1瓶        11,封板膜              2张
6,显色剂B液      6ml×1/瓶        12,密封袋              1个

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
5号标准品:150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
4号标准品:150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
3号标准品:150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2号标准品:150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1号标准品:150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。